[发明专利]一种以4.1R、CD29为靶点的抗肿瘤药物筛选模型的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于药物领域，涉及一种抗肿瘤药物筛选模型的制备，即制备C57BL/6J_4.1R-/-MEF细胞模型，以期作为以4.1R和CD29为靶标的新药制备和基因治疗的细胞筛选模型。 

背景技术

蛋白4.1(指红细胞膜蛋白经SDS-PAGE后第4.1条显色带)是红细胞中以血影蛋白(spectrin)为基础的细胞膜骨架的一个基本成分^[1]，是将红细胞跨膜蛋白和血影蛋白-肌动蛋白骨架网络连接起来的桥梁，对维持红细胞的形状、粘附、脆性及正常生理功能发挥重要作用^[2]。人类蛋白4.1表达缺失会导致溶血性贫血 ^[3]。因蛋白4.1最初是在成熟红细胞中发现的，故命名为4.1R。最近几年，又相继发现了三种与4.1R有很高同源性的蛋白质，分别命名为4.1G(广泛表达)，4.1N(主要在神经元中表达)，4.1B(主要在脑中表达)，这四种蛋白质的基因即构成了蛋白4.1基因家族。蛋白4.1家族成员都具有三个高度保守的功能性结构域：氨基端的膜结合结构域MBD(Membrane binding domain)、血影蛋白-肌动蛋白结合结构域SABD(Spectrin actin binding domain)和参与细胞信号转导的羧基末端结构域(C-terminal domain)。其氨基末端膜结合结构域MBD在序列和空间折叠上都与ERM蛋白(Ezrin radisin moesin)氨基末端膜结合结构域具有同源性，被统称为FERM结构域(four-point-one，ezrin，radixin，moesin domain)，拥有FERM结构域的蛋白被称为4.1蛋白超家族^[1]。已有报道表明ERM蛋白在T细胞活化中发挥重要作用^[4-5]，且Tang TK等^[6-7]人也观察到人T细胞中4.1R在微管组织中心(MTOS)高表达。 

最近有研究发现，4.1R的缺失会使小鼠CD4⁺T细胞大量活化增殖，即提出4.1R在T细胞活化中可能起着重要的调控作用^[8]。本专利建立的4.1R敲除小鼠胚胎成纤维细胞，可在体外研究4.1R对T细胞依赖性免疫应答的调控，为以4.1R为药靶研究T细胞相关性疾病提供实验材料。 

在国内，胃癌、结肠癌、食管癌和乳腺癌的发病率较高，且治愈较难，因此寻找有效的靶点制备抗癌药物对缓解病情具有一定的临床应用价值。有文献报道，在脑膜瘤^[9]、室管膜瘤^[10]、非小细胞肺癌^[11]、食管小细胞癌^[12]、乳腺癌 ^[13]和胃癌^[14]等多种癌症中，蛋白4.1表达下降或表达缺失，并且越来越多的临床和实验证据证实编码蛋白4.1的基因在多种肿瘤中表现出抑癌基因的作用 ^[15]，这表明蛋白4.1与肿瘤的发生和发展有着密切的关系。高艳峰等报导4.1B在食管鳞状细胞癌中表达异常^[16]。因此，以蛋白4.1作为药靶进行抗肿瘤药物的筛选具有一定的临床意义和实用价值。