[发明专利]细胞培养混合物的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物制品的分离纯化的方法，特别涉及用以获得目的生物制品的细胞培养混合物的分离纯化方法。

背景技术

目的生物制品的培养混合物的分离纯化是生物制品生产中最关键步骤之一，它是收获目的培养混合物与进一步下游加工之间的枢纽步骤，对生物制品的产量、质量、可重复性有着直接的影响，也决定了生物制品整体生产工艺的效率和成本耗费。

现有生物制品生产工艺中常用的目的培养混合物分离纯化方法多为如离心、凝胶层析、过滤等几种方法的联合使用，多存在着许多问题，首先培养混合物在设备之间的转移容易造成产品的污染，其次，所使用的设备单批次处理量较少，不易进行生产规模扩大，再次，所用设备重复使用需进行反复清洗，增加了劳动力与生产成本的耗费。另外，现有工艺常常不能完全分离纯化目的培养混合物，造成最终的生物制品异源物质比较多。

目前，人类、家禽、家畜的常规和非常规免疫是保障人类生命、健康的重要手段，所以各种病毒疫苗的需求量也在不断地增加。而大多数病毒疫苗都是通过细胞培养后分离纯化获得的，所以对于高效率、高品质地分离纯化细胞培养混合物的需求越来越受到人们的关注。

发明内容

使用现有的技术手段来分离纯化细胞培养混合物，由于存在上述问题，分离纯化过程复杂，不能大量、快速且高纯度地分离纯化细胞培养混合物，造成分离纯化的成本较高，生产时间长等缺陷，另外，最终的生物制品异源物质比较多，使用时副反应比较大。可见，现有的分离纯化方法已无法满足现实生产、生活的需要。

因此，本发明特别针对细胞培养混合物的分离提纯进行了潜心研究，发现细胞培养混合物具有组分包含复杂、目的产物的含量普遍较低、起始用量较大、不同病毒颗粒大小具有一定差异等特点。

对于细胞培养混合物这类生物制品，本发明人开创性地提出了对其进行分离纯化的新方法，克服了上述缺陷。

本发明提供了一种细胞培养混合物的分离纯化方法，1.一种细胞培养混合物的分离纯化方法，包括使细胞培养混合物经过滤器进行过滤，该过滤器具有至少两层孔径不同的过滤膜，过滤膜的各层膜的公称孔径在滤液流动方向上逐级变小，而且第一层过滤膜的公称孔径约为2～10μm，最后一层过滤膜的公称孔径约为0.1～0.2μm。

2.根据技术方案1所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，细胞培养混合物选自动物用病毒细胞培养混合物、人用病毒细胞培养混合物或者分泌抗体的杂交瘤细胞培养混合物。

3.根据技术方案1所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，所述过滤器具有三层、四层或五层过滤膜。

4.根据技术方案1所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，在过滤过程中，过滤膜前后的压差约为0.05-0.1MPa。

5.根据技术方案1至4任一项所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，所述过滤器是过滤膜为折叠形式的过滤器。

6.根据技术方案5所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，所述过滤器设置有

壳体；

折叠式的过滤膜将壳体内部分为中央区和边缘区。

7.根据技术方案1至4任一项所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，所以细胞培养混合物选自：口蹄疫病毒培养混合物，猪繁殖与呼吸综合征病毒培养混合物，猪瘟病毒培养混合物，猪肾细胞(PK细胞)及猪睾丸细胞(ST细胞)；狂犬病毒培养混合物，乙型肝炎病毒培养混合物，流行性乙型脑炎病毒培养混合物，甲型肝炎病毒培养混合物或者脊髓灰质炎病毒培养混合物。

8.根据技术方案1至4任一项所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，待过滤液的处理量为：每0.01Mpa压差下每平方米过滤膜的流量范围约为100～200L。

9.根据技术方案1所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，所述细胞培养混合物是口蹄疫病毒培养混合物，所述过滤膜是两层过滤膜，第一层过滤膜的公称孔径约为2～10μm，第二层过滤膜的公称孔径约为0.1～0.2μm。

10.根据技术方案1所述的细胞培养混合物的分离纯化方法，其中，所述细胞培养混合物是猪繁殖与呼吸综合征病毒培养混合物，所述过滤膜是三层过滤膜，第一层过滤膜的公称孔径约为2～10μm，第二层过滤膜的公称孔径约为0.2～2μm，第三层过滤膜的公称孔径约为0.1～0.2μm。

本发明的一种细胞培养混合物的分离纯化方法，具有针对性强，处理量大、分离纯化步骤简单、产品质量稳定、成本低等优点，特别适合用于分离纯化口蹄疫病毒培养混合物或猪繁殖与呼吸综合征病毒培养混合物等，得到纯度较高的病毒疫苗混合物。