[发明专利]一种动物细胞的分离方法及分离装置

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品生产过程中动物细胞的贴壁培养技术，尤其是贴壁生长的动物细胞从微载体上分离出来的方法及其分离装置。

背景技术

在生物制品生产过程中，特别是疫苗和蛋白药物的生产，利用生物反应器来培养贴壁生长的动物细胞，并利用微载体来增加细胞贴壁生长的表面积，才能实现规模化的生产。为了能实现规模化生产，必须要实现生物反应器的逐级放大，而实现生物反应器的逐级放大的关键技术是如何把贴在微载体上面的动物细胞分离出来。

传统的分离方法是采用机械震荡来实现，其方法是：将表面上长满细胞的微载体经过胰酶处理后，利用震荡原理，将放在容器中的微载体快速震荡，将细胞从微载体表面分离出来，再把细胞单独取出接种到更大的反应器或者将细胞与原来的微载体一起接种到更大的反应器中。这种方法可以实现把细胞从微载体上分离的目的，但是由于生物制品对容器密封要求非常的高，不得有任何泄露而造成污染，而机械震荡不可避免的对整个容器进行震荡，会影响容器的密封性能；另外，利用这种方法将细胞从微载体上完全分离需要的时间较长，并且震荡产生的剪切力非常的大，这样，就会对细胞造成非常大的损伤，影响下一步放大时细胞的正常生长。

为了克服采用机械震荡来分离细胞所存在的问题，现在，人们使用得比较多的方法是机械搅拌，即将表面上长满细胞的微载体经过胰酶处理后，利用机械搅拌的剪切力，将细胞从微载体表面分离出来。在公开号为CN1483805A公开日为2004年3月24日的专利文件中公开了一种用于动物细胞扩大接种的消化反应器，包括由一筒体构成的消化区，该消化区包括：与筒体上端密封连接的盖板，安装于盖板中央，与之可转动且密封连接的搅拌装置，与盖板密封衔接且流体相通的至少一个进料口，与盖板密封衔接且流体相通的至少一个出/入气口；还包括由一底封头构成的与消化区下端周缘密封衔接的分离区，该分离区包括：固定于底封头上端面的筛网，所述筛网的孔径大于所述动物细胞直径且小于动物细胞所附着的载体直径，与底封头密封衔接且流体相通的至少一个进/出料口，至少一个洗涤液/消化液入口和至少一个洗涤液/消化液出口。专利文件中公开的搅拌装置就是将细胞从微载体中分离的装置，其就是利用搅拌原理。这种方法虽然能够实现把细胞从微载体上分离的目的，但是由于这种方法的搅拌速度只能低速进行，否则细胞将会造成损伤，因此，需要很长的时间才能将细胞从微载体上完全分离，而过长的时间将会造成细胞的生长状态变差，影响下一步放大时细胞的正常生长。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种动物细胞的分离方法，利用本发明的分离方法，贴壁动物细胞容易从微载体上分离，贴壁动物细胞分离时不容易损伤，贴壁动物细胞从微载体上完全分离所需要的时间短。

本发明的另一目的是为了提供一种动物细胞分离的装置，利用本发明的分离装置，贴壁动物细胞容易从微载体上分离，贴壁动物细胞分离时不容易损伤，贴壁动物细胞从微载体上完全分离所需要的时间短。

为达到上述目的，动物细胞分离的方法为使具有流速的贴有动物细胞的微载体与容器壁产生撞击，使动物细胞从微载体上分离。

用撞击容器壁的方法使贴壁动物细胞从微载体上分离，不会产生大的剪切力，这样，不需要将分离控制在较低的速度下进行，因此，贴壁动物细胞分离时不容易损伤，完全分离所需要的时间短；由于贴壁动物细胞和微载体是通过撞击力来实现分离的目的，因此，贴壁动物细胞容易从微载体上分离。

作为改进，贴有动物细胞的微载体与容器壁产生撞击的步骤为：

(1)用泵将长满动物细胞的微载体从第一容器经出料管抽出并通过输出管使长满动物细胞的微载体撞击第一容器的内壁，使动物细胞和微载体重新流入到第一容器内；

(2)观察动物细胞与微载体的分离情况，如果动物细胞与微载体已经分离，则使泵停止工作；如果动物细胞与微载体没有完全分离，则继续上述的(1)步骤直到动物细胞与微载体完全分离为止。

上述分离方法，由于用撞击容器壁的方法使贴壁动物细胞从微载体上分离，不会产生大的剪切力，这样，不需要将分离控制在较低的速度下进行，因此，贴壁动物细胞分离时不容易损伤，完全分离所需要的时间短；由于贴壁动物细胞和微载体是通过撞击力来实现分离的目的，因此，贴壁动物细胞容易从微载体上分离。由于每撞击一次就对贴壁动物细胞从微载体上分离的情况进行观察一次，当完全分离后，就停止撞击过程，因此，能够及时跟踪到贴壁动物细胞的分离情况，避免因贴壁动物细胞完全分离后继续进行撞击而浪费时间。

作为改进，贴有动物细胞的微载体与容器壁产生撞击的步骤为：