[发明专利]嵌合狂犬病病毒株rLEP333Q-L(H)的构建及其生物学功能的研究

权利要求书

1.一株嵌合狂犬病病毒株，该嵌合病毒是在亲本弱毒疫苗株 Flury-LEP基础上，将G蛋白第333位精氨酸突变为谷氨酰胺，同时将LEP 的L基因替换为HEP的L基因，并拯救获得的感染性病毒颗粒，其中构 建的病毒株为rLEP333Q-L(H)。

2.权利要求1的病毒株，其中所述Flury-LEP的全长基因组cDNA序 列如SEQ ID NO：1所示。

3.权利要求1的病毒株，其中所述HEP的L基因的序列如SEQ ID  NO：8所显示。

4.一种构建权利要求1-3中任一项的病毒株的方法，所述方法包括下 列步骤：

1)构建转录质粒，所述转录质粒包含将G蛋白第333位精氨酸突变 为谷氨酰胺，同时将LEP的L基因替换为HEP的L基因的Flury-LEP全 长基因组cDNA序列；

2)构建一个或多个转录辅助质粒，所述辅助质粒包括编码狂犬病病毒 Flury-LEP核蛋白N、磷酸蛋白P及聚合酶蛋白L基因的开放阅读框架的 cDNA序列；

3)将所述转录质粒和转录辅助质粒共转染允许狂犬病病毒Flury-LEP 弱毒疫苗株复制的宿主细胞，培养转染后的宿主细胞；

4)收获上清液，拯救嵌合病毒株。

5.权利要求4的方法，其中所述转录质粒为pCI-LEP333Q-L(H)。

6.权利要求4的方法，其中所述转录辅助质粒分别为pCAGG-N、 pCAGG-P或pCAGG-L。

7.权利要求4的方法，其中所述宿主细胞为BHK-21细胞。

8.一种载体，其包含将G蛋白第333位精氨酸突变为谷氨酰胺，同 时将LEP的L基因替换为HEP的L基因的Flury-LEP全长基因组cDNA 序列。

9.权利要求1-3中任一项的病毒株和权利要求8的载体用于制备弱毒 疫苗的应用。