[发明专利]一种党参多糖的硫酸化修饰方法

说明书

一、技术领域

本发明一种党参多糖的硫酸化修饰方法，属于中药多糖的结构改造技术领域。

二、背景技术

多糖是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物大分子物质，具有抵抗感染、 增强免疫、抗氧化和防治肿瘤和病毒性肝炎、类风湿症、艾滋病等免疫损伤或免疫缺 损症等多方面的功能和生物活性。随着化学和生物学的快速发展和分离技术的提高， 多糖的生物学功能、特别是作为生命物质参与生命的全部时间和空间功能，突破了多 糖作为支持组织和能量来源的传统观念，发现其具有更广泛的生物学功效，特别是具 有免疫增强、抗病毒等功效使得多糖物质成为人类及动植物医疗、保健、病虫害防治 领域的重要成员。多糖的研究已成为天然药物研究和生命科学研究的热点之一。

在对多糖的结构及其活性的研究中，科技人员注意到以下问题：①自然界中存在 的多糖并不都具有活性。②有些多糖由于结构或理化性质等障碍而不利于其生物学活 性的发挥。③也有些多糖尽管药效良好，但同时也会产生一些不良反应，甚至毒副作 用。④有些从天然生物体内分离的多糖活性较弱，有待进一步提高。因此，采取一定 的方法对多糖结构进行适当修饰是解决以上问题的根本途径，通过结构修饰能提高或 赋予多糖活性、降低某些多糖的毒副作用。

党参为桔梗科党参属植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的根，其味甘性 平，无毒，具有补中益气，健脾益肺等功效，主治脾胃虚弱、气短心悸、热病伤津、 虚喘咳嗽等症。现代药理学研究证实，党参具有抗肿瘤、增强免疫功能及抗氧化等多 种生物学活性，其主要活性成分为党参多糖(Codonopsis pilosula polysaccharide，CPPS)， 而党参多糖的抗病毒活性鲜见报道。根据文献和本研究室的前期工作证明，硫酸化修 饰能够显著提高多糖的生物活性、尤其是抗病毒活性。本发明首次对党参多糖进行硫 酸化修饰，建立了党参多糖的硫酸化修饰方法，优化了修饰条件，发现硫酸化修饰能 显著党参多糖的抗病毒活性。

三、发明内容

技术问题本发明针对中药多糖生物活性低的问题，提供一种党参多糖的硫酸化 修饰方法，达到显著提高党参多糖抗病毒活性的目的。

技术方案

一种党参多糖的硫酸化分子修饰方法，包括：提取、纯化党参多糖，用氯磺酸一 吡啶法对党参多糖进行硫酸化修饰，其特征在于，修饰条件为氯磺酸与吡啶的质量比 1∶6、反应温度80℃、反应时间3h。并筛选出一种活性最好的取代度为1.26的硫酸 化党参多糖产品。

有益效果

1.建立了党参多糖的硫酸化修饰方法，通过正交实验优化了党参多糖的硫酸化修 饰条件。

2.证明硫酸化修饰能够显著提高党参多糖的抗病毒活性，并筛选出一种抗病毒活 性最好的硫酸化党参多糖。

与现有技术相比，本发明优点如下：

1.党参多糖的硫酸化修饰国内外未见报道，本发明提供了一种党参多糖的硫酸化 修饰方法及其优化的修饰条件，填补了国内外研究的空白。

2.党参多糖的抗病毒活性未见报道，通过本发明的实施，证明天然党参多糖的抗 病毒作用微弱，通过硫酸化修饰能够显著提高其抗病毒活性，并筛选出一种活性最好 的硫酸化党参多糖(取代度为1.26)，在两种给药方式中的病毒抑制率最高(分别为 76.5％～83.3％)，表明其抗病毒作用最强，可以作为研制新型抗病毒药物的材料。为研 制新型抗病毒药物提供了材料和示范。

四、具体实施方式

1.党参多糖的提取

用水煎-超声醇沉法。取党参饮片500g，粉碎，置于索式提取器中，用80％乙醇 回流3次，至回流液接近无色，药渣加入20倍水中，80℃超声(功率80W，每次 10min)预处理2次，再煎煮3次，第一次2h，第二次1h，第三次0.5h，合并三 次滤液，浓缩至650mL。加95％乙醇使醇浓度达到80％，静至过夜，离心取沉淀，再 用乙醇、丙酮洗涤，干燥，得到粗党参多糖。

2.党参多糖的纯化

(1)去蛋白：将粗党参多糖配成5％的水溶液，首先用反复冻融法(-20℃冷冻、 室温下缓慢融化，5000rpm离心)除去部分蛋白。然后加入溶液体积1/5的三氯甲烷， 随之加入三氯甲烷体积1/5的正丁醇，剧烈震荡20min，5000rpm离心20min，分去 水层与有机层交界处的变性蛋白，反复处理6次。