[发明专利]一种纳米结构的导电聚苯胺固定化酶的制备方法

权利要求书

1.一种纳米结构的导电聚苯胺固定化酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

一种纳米结构的导电聚苯胺固定化酶的制备方法，包括以下步骤：

一、首先采用“无模板”法制备纳米结构的导电聚苯胺，将苯胺单体超声分散于水溶液中，苯胺单体与水溶液的比例按2-5mmol∶10-20mL，然后，一次性加入浓度为0.1-2M(mol/L)的氧化剂水溶液中，氧化剂为(NH₂)₂S₂O₈、Fe(NO₃)₃、FeCl₃、Fe₂(SO₄)₃或H₂O₂，氧化剂水溶液中氧化剂与苯胺单体的摩尔比为10∶1-1∶1，静置反应12-24小时，将混合溶液离心，离心后的固体依次用蒸馏水、无水乙醇和乙醚洗涤，最后在10-60℃下真空干燥18-24小时，得到墨绿色的导电聚苯胺纳米纤维；

二、将制得的导电聚苯胺纳米纤维分散于pH范围为6-8的磷酸缓冲溶液中，导电聚苯胺纳米纤维与磷酸缓冲溶液分散时的比值按1-2g∶1L，室温下磁力搅拌至均匀，然后，将游离酶溶解于同样的缓冲溶液中，导电聚苯胺纳米纤维与游离酶的质量比为1∶0.0025-1∶1，4-10℃下在1-5体积份的缓冲溶液中于60-120rpm的摇床中共价偶联4-72小时，离心过滤，去除上清液，固定化酶用同样pH的缓冲溶液清洗3-5次，自然干燥，得到墨绿色的纳米结构导电聚苯胺固定化酶，4℃冰箱中保存。

2.根据权利要求1所述的一种纳米结构的导电聚苯胺固定化酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

一、首先采用“无模板”法制备纳米结构的导电聚苯胺，将苯胺单体超声分散于水溶液中，苯胺单体与水溶液的比例按5mmol∶20mL，然后，一次性加入0.25M(mol/L)的氧化剂水溶液中，氧化剂为(NH₂)₂S₂O₈，氧化剂水溶液中氧化剂与苯胺单体的摩尔比为1∶1，静置反应12小时，将混合溶液离心，离心后的固体依次用蒸馏水、无水乙醇和乙醚洗涤，最后在60℃下真空干燥18小时，得到墨绿色的导电聚苯胺纳米纤维；

二、将制得的导电聚苯胺纳米纤维分散于pH范围为7的磷酸缓冲溶液中，导电聚苯胺纳米纤维与磷酸缓冲溶液分散时的比值按1g∶1L，室温下磁力搅拌至均匀，然后，将辣根过氧化物酶溶解于同样的缓冲溶液中，导电聚苯胺纳米纤维与辣根过氧化物酶的质量比为1∶0.01，4℃下在2体积份的缓冲溶液中于120rpm的摇床中共价偶联24小时，离心过滤，去除上清液，固定化酶用同样pH的缓冲溶液清洗3次，自然干燥，得到墨绿色的纳米结构导电聚苯胺固定化酶，4℃冰箱中保存。

3.根据权利要求1所述的一种纳米结构的导电聚苯胺固定化酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

一、首先采用“无模板”法制备纳米结构的导电聚苯胺，将苯胺单体超声分散于水溶液中，苯胺单体与水溶液的比例按2mmol∶10mL，然后，一次性加入2M(mol/L)的氧化剂水溶液中，氧化剂为Fe₂(SO₄)₃，氧化剂水溶液中氧化剂与苯胺单体的摩尔比为10∶1，静置反应20小时，将混合溶液离心，离心后的固体依次用蒸馏水、无水乙醇和乙醚洗涤，最后在50℃下真空干燥24小时，得到墨绿色的导电聚苯胺纳米纤维；

二、将制得的导电聚苯胺纳米纤维分散于pH范围为8的磷酸缓冲溶液中，导电聚苯胺纳米纤维与磷酸缓冲溶液分散时的比值按2g∶1L，室温下磁力搅拌至均匀，然后，将木质素过氧化物酶溶解于同样的缓冲溶液中，导电聚苯胺纳米纤维与木质素过氧化物酶酶的质量比为1∶0.001，6℃下在5体积份的缓冲溶液中于80rpm的摇床中共价偶联72小时，离心过滤，去除上清液，固定化酶用同样pH的缓冲溶液清洗4次，自然干燥，得到墨绿色的纳米结构导电聚苯胺固定化酶，4℃冰箱中保存。