[发明专利]一种烷氧羰基类氨基保护基保护的氨基酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于多肽合成领域，特别涉及一种烷氧羰基类氨基保护基保护的氨基酸的制备方法。

背景技术

烷氧基羰基类氨基保护基特别是芴甲氧羰基(Fmoc)以及烯丙氧羰基(Alloc)在多肽合成中应用非常广泛。其中，Fmoc基团是α氨基保护的主要选择之一，而Alloc基团可以在Fmoc以及BOC正交保护策略的多肽合成中使用。现有技术中，烷氧羰基类氨基保护基的引入剂主要为酰氯，叠氮或活泼碳酸酯，通过使这些引入剂与氨基酸反应获得氨基被保护的氨基酸。酰氯在这些引发剂中活性最高。然而，其在与氨基酸的反应过程中伴随着很多副反应，使得反应后的产物中含有相当比例的副产物二肽甚至是三肽，这种较高比例的二肽副产物将导致最后的多肽合成物中引入不需要的氨基酸。碳酸酯和叠氮的活性较低，可以一定程度上降低副反应，然而，碳酸酯类引入剂在合成很多α氨基保护的氨基酸时，产物中含有0.3％左右的杂质，给原料药的工业化生产带来很严重的问题。叠氮类引入剂活性最弱，然而大量使用易爆炸的叠氮化合物，风险大，安全性差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种改进的烷氧羰基类氨基保护基保护的氨基酸的制备方法。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

一种烷氧羰基类氨基保护基保护的氨基酸的制备方法，该方法使保护基引入剂与氨基酸在溶剂中发生反应以获得所述的保护的氨基酸，所述保护基引入剂为烷基-2-吡啶乙腈肟碳酸酯，其中所述烷基为选自苄基、叔丁基、芴甲基、三甲基硅乙基以及烯丙基中的一种。

根据本发明，所述反应可以在温度10～40℃以及pH7～9下进行，其中优选在pH7.5～8.5下进行。所述溶剂至少包括水以及至少一种用于溶解所述保护基引入剂的有机溶剂，用于调节所述pH的试剂优选为选自碳酸钠、碳酸氢钠以及三乙胺中的一种。

根据本发明的一个具体方面，所述的保护基引入剂为芴甲基-2-吡啶乙腈肟碳酸酯(Fmoc-肟)，有机溶剂为丙酮。

根据本发明的又一具体方面，所述的保护基引入剂为烯丙基-2-吡啶乙腈肟碳酸酯(AllOC-肟)，有机溶剂为二氧六环。

根据本发明，所述氨基酸不限定于某一具体氨基酸，其可以为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、组氨酸或精氨酸等。但是本发明方法特别优选用于α氨基酸的制备。

由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明采用烷基-2-吡啶乙腈肟碳酸酯为保护基引入剂，其主要特性是容易制备，稳定性高，有良好的晶型且活性高，通过传统的反应方法就可以高收率获得无杂质的烷氧羰基类氨基保护基保护的氨基酸。将Fmoc-肟应用于在合成Fmoc-Gly-OH，取得非常好的结果，几乎没有副反应发生，同样将AllOC-肟应用于合成AllOC-Gly-OH也获得非常高的收率以及纯度，通过反相HPLC以及NMR检测几乎没有二肽的副反应发生。

具体实施方式

甘氨酸由于碳链最短，在α氨基保护时最容易发生副反应。下面将以制备保护的甘氨酸为例，对本发明做进一步详细的说明。

实施例1

一种芴甲氧羰基保护的甘氨酸(Fmoc-Gly-OH)的制备方法，其包括如下步骤：

(1)、合成芴甲基-2-吡啶乙腈肟碳酸酯(Fmoc-肟)：取氯甲酸芴酯2.58g(10mmol)溶于30ml二氯甲烷中，搅拌溶解后加入2-吡啶乙腈肟10mmol，冰水浴冷却温度至0℃，滴加碳酸钠2.1g(20mmol)溶于水20ml的混合溶液，滴完后保温搅拌0.5h，然后室温搅拌2h，TLC检测反应结束，加入50ml二氯甲烷，静置分层，二氯甲烷层依次用30ml水洗，饱和食盐水30ml洗涤后，经无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，用二氯甲烷重结晶即得白色固体即为Fmoc-肟。mp 165-166℃；收率93％。

¹HNMR(CDCl₃)：δ4.38(t，1H，CH，J＝7.7Hz)，4.62(d，2H，CH₂，J＝7.7Hz)，7.36，7.44(2t，4H，Ar-H，J＝6.9Hz)，7.48-7.51(m，1H，Ar-H)，7.66，7.79(2d，4H，Ar-H，J＝7.7Hz)，7.84(t，1H，Ar-H，J＝6.9Hz)，8.14(d，1H，Ar-H，J＝8.4Hz)，8.79(d，1H，Ar-H，J＝4.6Hz)；