[发明专利]一种石斑鱼白细胞介素EcIL-1β基因、编码的蛋白及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及石斑鱼基因工程技术领域，具体涉及一种石斑鱼白细胞介素EcIL-1β基因、编码的蛋白及其制备方法和应用。 

背景技术

促炎症因子白细胞介素(IL)-1β，是启动和调控免疫反应必需的信号分子，对多种免疫细胞的分化、生长和活化增殖有重要的调节作用。白细胞介素-1β氨基酸序列的特征是含有两个必备的保守结构，包括：成熟肽所形成的一个三叶草型功能结构域，是IL-1蛋白与其特异受体结合并引发细胞内信号通路的关键位点；其蛋白羧基端含有IL-1家族保守的标识序列。 

IL-1具有广泛的生物学活性。目前已知IL-1不仅对多种免疫细胞有重要的调节作用，如可以影响胸腺细胞的增殖，B细胞的生长和分化以及IL-2、IL-6的生成；而且它也参与造血、骨代谢、压力反应、睡眠调节、摄食、神经内分泌及抗肿瘤等多种生理过程，并与发热、炎症以及某些疾病如中风、阿尔茨海默氏病、唐氏综合症，以及自身免疫性疾病有关。 

IL-1可以促进胸腺细胞、T细胞的活化、增殖和分化。T细胞经抗原等刺激后表达IL-1受体，在IL-1作用下活化分泌IL-2、干扰素γ(IFNγ)等细胞因子，并表达IL-2高亲和力受体进而令T细胞发生增殖和分化。IL-1还可以增加T细胞表面MHC II类抗原的表达，诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的分化。IL-1还能协同IL-4等细胞因子刺激B细胞的增殖和分化，促进免疫球蛋白的合成和 分泌。IL-1还作用于单核细胞和巨噬细胞，诱导单核-巨噬细胞产生IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)，并通过单核细胞和巨噬细胞产生IL-8介导对中性粒细胞的趋化作用，刺激中性粒细胞释放炎症蛋白和介质，直接参与炎症发生过程，抑制粒细胞凋亡，促进粒细胞黏附和迁移。 

与哺乳动物相似，鱼类IL-1β重组蛋白能够影响刺激免疫细胞的增殖，增加IL-1β自身的基因表达，以及诱导下游免疫基因，如环氧化物酶-2(COX-2)，MHC II基因的表达，并能够作为鱼类免疫调节剂，加速体内特异抗体的生成。重组的IL-1β蛋白并可影响鱼类的神经内分泌。初步研究的结果表明，灌流高剂量的重组鲤鱼IL-1β会引致其垂体释放α-促黑激素和β-内啡肽。Holland等以不同剂量的重组IL-1β蛋白和脂多糖(LPS)分别注射虹鳟，能明显检测到血浆中的皮质醇以剂量或时间效应显著提高。由于促肾上腺皮质激素(ACTH)可促进肾上腺皮质分泌相应的皮质激素，主要以皮质醇的形式，因此利用ACTH的抑制剂——地塞米松可阻断重组IL-1β或LPS、介导的血浆中皮质醇的升高，这说明IL-1β和LPS调节皮质醇分泌是通过下丘脑-垂体轴来实现的。 

斜带石斑鱼(orange-spotted grouper，Epinephelus coioides)属鲈形目(Perciformes)、鮨科(Serranidae)，石斑鱼亚科(Epinephelinae)，石斑鱼属(Epinephelus)。主要分布于沿海近礁水域，是我国华南沿海一带以及东南亚地区重要的海水养殖鱼类，肉质鲜嫩，味美，营养丰富，经济价值高。近年来，石斑鱼养殖业发展迅速，但普遍采用高密度网箱养殖，因此人工饲养鱼群的疾病易感机率大。目前在石斑鱼人工养殖中还没有一种能有效促进疫苗产生的免疫佐剂和有效增强鱼类免疫的饲料添加剂。 

发明内容

本发明的目的在于根据现有技术中存在的不足，提供一种石斑鱼白细胞介素EcIL-1β基因。 

本发明另一目的在于提供上述基因编码的蛋白。 

本发明再一目的在于提供上述基因编码的蛋白的制备方法。 

本发明还有一个目的在于提供上述基因编码的蛋白的应用。 

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现： 

一种石斑鱼白细胞介素EcIL-1β基因，其序列如SEQ ID NO：1所示，该基因是通过同源克隆的方法从斜带石斑鱼脾脏中分离得到的。 

上述石斑鱼白细胞介素EcIL-1β基因所编码的蛋白，其氨基酸序列SEQ IDNO：3所示，共254个氨基酸，等电点为5.10，分子量为28.66千道尔顿，含有一个潜在的N-糖基化位点Asn⁸和一个位于羧基端的IL-1家族表示序列：(L)-M-(SV)-AH-(P)-NW-(YIST)-AEADNMP-(V)(中括号表示保守氨基酸)。 

本发明石斑鱼白细胞介素EcIL-1β基因所编码的蛋白可以通过表达载体在大肠杆菌中以胞内可溶的形式表达。具体制备方法包括如下步骤：