[发明专利]一种利用玉米秸秆制备可溶性膳食纤维高产菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种利用玉米秸秆制备可溶性膳食纤维高产菌株，能够发酵降解秸秆为可溶性膳食纤维。

2.权利要求1中所述菌的筛选方法，其特征在于：

将土壤样本捣碎后，取10克加入90毫升无菌水中，加入玻璃珠，25℃、150r/min在摇床上振荡1h，室温静置10min，取上清液1毫升，加入含9毫升无菌水的试管中，振荡，依次梯度稀释，稀释到10^-10；制备筛选培养基平板，从试管中取0.2毫升土壤悬液涂平板，30℃倒置培养两天；挑选出其中透明圈大的菌落，每次挑单菌落再划线培养三代，得到纯菌株；将复筛得到的菌株接种于斜面培养基上，28℃培养4d，用灭菌的接种环将孢子刮下，加入到无菌盐水、玻璃珠的锥形瓶中，制成单孢子悬液，用灭菌的生理盐水调整其孢子数量为10⁶个/mL，吸取200μl接种于含100毫升发酵培养基的250毫升摇瓶中，振荡培养3天，将发酵液6000转/分钟离心20分钟，测滤纸酶活。

3.权利要求2所述的制备方法，其特征在于筛选培养基平板：1％纤维素粉，10％无机盐营养液，0.1％蛋白胨，20％琼脂粉，初始pH值7.0。

4.权利要求2所述的制备方法，其特征在于：发酵培养基：3％微晶纤维素，2％豆饼粉，0.3％ KH₂PO₄，0.2％(NH₄)₂SO₄，0.03％MgSO₄，0.1％CaCl₃。

5.权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

酶活力的测定：在血糖管底部放入1cm×6cm(50±1mg)的滤纸条，加0.5mL的适当稀释的酶液，1mLpH4.8的柠檬酸缓冲液混匀后，50℃水浴60分钟，加入3毫升DNS试剂，煮沸5分钟，加水定容到25mL，测540nm的OD值，与葡萄糖标准曲线对照，得到还原糖的量。

6.一种可溶性膳食纤维的制备方法，其特征在于：

称取1克汽爆玉米秸秆样品，加入20mL醋酸-醋酸钠缓冲液混匀，在沸水浴中煮沸1小时后，冷却，加入纤维素酶液10毫升酶解1.5h，加热到85℃，10min灭酶降温，再加入木瓜蛋白酶溶液(浓度为10g/L)酶解30min，迅速冷却过滤，滤液以4倍体积无水乙醇处理静置，通过已烘干至恒重的多孔玻璃漏斗进行过滤，并用乙醇清洗盛滤液的容器，将漏斗及沉淀物100℃烘干至恒重，得可溶性膳食纤维。