[发明专利]一组能有效下调PRDM1β表达的siRNA分子及其应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一组siRNA分子，具体地说，是关于一组能有效下调PRDM1β表达的siRNA分子及其应用。

【背景技术】

淋巴瘤是原发于淋巴结或结外淋巴组织的恶性肿瘤。在我国，淋巴瘤发病率约为3-4/10万，每年新发患者约4.5万人，死亡人数超过2万人，发病率占男性恶性肿瘤的第9位，占女性恶性肿瘤的第10位。并且发病率呈逐年升高趋势，严重威胁人类健康。

淋巴瘤分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin Lymphoma，NHL)两大类，其中，以NHL为主，大约占到80-90％。淋巴瘤常采用联合化疗、放疗、免疫靶向治疗及骨髓移植等综合方案治疗。尽管淋巴瘤的治疗取得了很大进步，能使近一半患者长期无病生存，但仍有约半数以上的患者对治疗反应差，预后不理想，影响淋巴瘤预后的因素很多，但主要与病理亚型、分期、国际预后指征(IPI)和病变特殊部位有关。

淋巴瘤是一个高度异质性疾病，平衡易位导致的BCL6，BCL2，c-MYC等基因表达异常，基因扩增，非随机染色体缺失以及异常的体细胞超突变是常见的发病机制，但也有部分患者未发现已知突变。这些发病因素中有些会直接影响淋巴瘤的预后，也有一些因素通过影响下游靶分子的表达，间接影响淋巴瘤的预后。因此，那些在B细胞及T/NK细胞发育、分化、增殖中起关键作用的基因的表达变化，可能对判断淋巴瘤的预后具有重要意义。PRDM1β就是一种与淋巴瘤预后相关的转录因子。

PRDM1(PR domain containing 1，with ZNF domain)是一个含有5个锌指结构的转录抑制因子，又名B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(B-lymphocyteinduced maturation protein-1，BLIMP-1)。PRDM1基因定位于人类染色体6q21-q22.1，有两种转录本，即PRDM1α和PRDM1β。

最初人们只认识到PRDM1α，发现它在正常B淋巴细胞中具有重要生理功能，不但能够抑制细胞增殖，也可以促进细胞分化，在B细胞分化为成熟浆细胞中具有重要作用。因此，PRDM1被界定为一种肿瘤抑制基因。随后也有研究-证实，在弥漫大B细胞性淋巴瘤中，约20％左右的患者可以检出PRDM1基因突变，主要是点突变，绝大多数位于第二外显子/第二内含子连接处，导致产生功能缺失或降低的只含有少部分氨基端的截短型PRDM1蛋白。Pasqualucci等的研究还发现，在DLBCL患者中，不仅部分患者存在PRDM1基因突变，且85％以上的患者同时不表达PRDM1蛋白。越来越多的研究表明，大部分DLBCL患者不表达PRDM1蛋白，除基因突变导致的PRDM1表达降低外，表观遗传学因素如DNA甲基化、组蛋白乙酰化等因素可能也参与下调PRDM1表达，导致淋巴瘤发生。

而在研究PRDM1蛋白表达与预后关系时，Garcia等惊奇地发现，PRDM1表达阳性患者的无失败生存率明显低于PRDM1阴性患者，两者之间有统计学差异，提示PRDM1表达可能与淋巴瘤患者预后差有关。这一结论违背了传统意义上人们对PRDM1蛋白的认识，倘若PRDM1是一个肿瘤抑制基因，那么表达PRDM1患者的治疗效果应该比不表达PRDM1的患者好。

进一步的研究才发现，人类PRDM1基因有两种转录本，即PRDM1α和PRDM1β，分别编码由789个氨基酸构成的PRDM1α和由690个氨基酸构成的PRDM1β。PRDM1α蛋白主要由5个结构域构成，即氨基端酸性区、PR结构域、脯氨酸富集区、5个锌指结构和羧基端酸性区。PRDM1β与PRDM1α相比，缺失了氨基端101个氨基酸，包含氨基端酸性区和部分PR结构域。PR结构域在进化上高度保守，与SET结构域高度同源，对于PRDM1α发挥转录抑制作用非常重要，参与蛋白质与蛋白质之间的相互作用及染色质介导的基因表达。PRDM1α通过其PR结构域募集组蛋白去乙酰化酶、Groucho家族蛋白、组蛋白甲基转移酶G9a到其靶基因的启动子区，抑制靶基因的转录。PRDM1α抑制的靶基因主要有c-myc，MHC II类分子反式激活蛋白(MHC class II trans-activator，CIITA)，CD23b，B细胞特异性激活蛋白(B cell lineage-specific activator protein，BSAP)/Pax-5，Spi-B和Id3等。