[发明专利]海藻内生真菌二萜生物碱类化合物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及杀虫剂领域，具体地说是一种海藻内生真菌二萜生物碱类化合物及其制备和应用。

背景技术

随着化学合成农药使用时间的推移，其产生的不良影响已越来越突出。化学农药大规模地生产和无限制地大量使用，使70％～80％的农药直接渗透到环境中，残留非常严重，对土壤、地表水、地下水造成污染，并进一步进入生物链，对生物和人类健康都造成直接和潜在的危害。我国加入世界贸易组织后，因化学农药残留而导致的“绿色壁垒”严重制约着我国农产品的出口，传统农业产业面临着更大的风险和挑战。农业部已从2001年起在全国范围内实施“无公害食品行动计划”，而使用无公害农药又是实施这一目标的关键措施，于是人们把目光投向对环境更友好的生物农药。与传统的化学合成农药相比，生物农药具有对人畜和非靶标生物安全，环境兼容性好，不易产生抗性等优点。生物农药的开发应用对人类健康，环境保护和农业的可持续发展都具有极其重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种海藻内生真菌二萜生物碱类化合物及其制备和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

海藻内生真菌二萜生物碱类化合物：所述海藻内生真菌二萜生物碱类化合物如式(I)所示。

制备方法如下步骤制备：

1)将米曲霉(Aspergillus oryzae)cf-2接种于真菌液体培养基中静止发酵20-25天，过滤，发酵液经乙酸乙酯萃取浓缩，收集的菌丝体用有机溶剂提取，而后再经乙酸乙酯萃取浓缩，发酵液所得浓缩物和菌丝体所得浓缩物合并，即为粗提物；

所述米曲霉(Asp.oryzae)cf-2，其于2010年3月1日保存于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC M 2010045，株号为cf-2；

2)取步骤1)中的粗提物进行硅胶柱层析，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层层析检测；

3)收集步骤2)中以洗脱液体积比5-8∶1梯度的洗脱组分，将收集的洗脱组分进行凝胶柱层析、硅胶柱层析和薄层层析分离纯化，纯化收集Rf值为0.4-0.5组分，即得如式(I)所示的海藻内生真菌二萜生物碱类化合物。

步骤1)中的有机溶剂提取液为氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇或甲醇中一种或几种。步骤2)中的有机溶剂为石油醚-乙酸乙酯或石油醚-丙酮。步骤3)所述凝胶柱层析洗脱液为体积比1-2∶1的氯仿-甲醇或氯仿-乙醇；硅胶柱层析洗脱液为体积比3-8∶1比石油醚-乙酸乙酯或石油醚-丙酮；薄层层析展开剂为体积比为5∶1的石油醚-乙酸乙酯。步骤3)所述凝胶柱层析时收集经TLC检测紫红色斑点的组分；硅胶柱层析时收集以洗脱液体积比5-8∶1梯度的洗脱液。

应用：所述海藻内生真菌二萜生物碱类化合物具有杀虫作用。所述海藻内生真菌二萜生物碱类化合物可作为农药杀虫剂。

本发明具有以下优点：

本发明通过分离于海洋红藻异管藻的真菌米曲霉(Asp.oryzae)cf-2发酵经提取、分离获得的海藻内生真菌二萜生物碱类化合物，经杀虫活性实验得出化合物在100微克/毫升时对卤虫的致死率为42.9％。

具体实施方式：

下面结合实施实例对本发明做进一步阐述。

实施例1

海藻内生真菌二萜生物碱类化合物如式(I)所示。

实施例2

如式(I)所示的海藻内生真菌二萜生物碱类化合物的制备方法：

取平板上生长良好的真菌米曲霉(Asp.oryzae)cf-2菌种，其于2010年3月1日保存于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC M2010045，株号为cf-2；切成小块接种于PDB液体培养基中，每1L三角瓶中放300mL培养基，共30瓶，室温静止发酵23天，加入发酵液二分之一体积的乙酸乙酯杀灭真菌，过滤，分别收集菌丝体和发酵液。所述PDB液体培养基组成为每升含土豆汁200毫升，葡萄糖20克，蛋白胨5克，酵母膏3克，陈海水500毫升，蒸馏水300毫升。