[发明专利]山竹果皮花色苷的提取方法及其在制备抗炎药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及到一种具有特异靶向性的天然抗炎药物分子的分离提取及其应用。

背景技术

炎症反应在人体防御外来病原体入侵以及修复自身损伤组织中，扮演着相当重要的角色，它受到免疫系统高度精细的调控，一旦这种调节失控将会引起严重的炎症反应或发展成慢性炎症，导致多种严重疾病，症状表现为从轻微的牛皮癣到哮喘和类风湿关节炎等。另外，还与动脉粥样硬化、系统性红斑狼疮、肾小球肾炎及急性心肌梗死等疾病有关，因而被公认为当今危害人类健康的三大顽疾之一，预防和治疗炎症及相关综合症始终是医学领域的难题。大量的研究表明P-选择素是参与炎症反应的重要粘附分子之一，它可以作为抗炎药物研发的新靶点。

炎症反应是一个多步骤的过程，其中白细胞在血管内皮细胞上的滚动、粘附和渗出是炎症过程的重要环节，其分子基础在于白细胞与血管内皮细胞表面粘附分子之间的相互作用。选择素家族是参与炎症反应起始过程的重要粘附分子。选择素家族包括三个成员：P-选择素、E-选择素和L-选择素。其中P-选择素主要分布于内皮细胞的Webel-Palade小体中。当血管内皮受到炎症因子刺激后，P-选择素在几分钟之内就被转运到活化的内皮表面。P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)是P-选择素的高亲和力配体，表达于所有的血源性细胞表面，如中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等。在炎症反应过程中，内皮细胞表面的P-选择素与白细胞表面的PSGL-1结合后，使白细胞在血管内皮细胞上发生起始粘附和滚动，进而引发一系列炎症事件。资料表明，P-选择素参与了多种疾病的病理生理过程，其过渡或持续表达已经成为某些组织炎症病变的标志。阻断P-选择素与配体的结合，可以抑制白细胞与血管内皮的粘附作用，从而有效的阻断炎症反应的产生。筛选P-选择素的高效拮抗剂，阻断白细胞粘附，可以为炎症及其相关重大疾病的治疗提供新的策略和手段。

花色苷是植物天然色素，广泛存在于植物的花、果实和叶中。花色苷是一种高效的抗氧化剂，有研究证明其抗氧自由基的能力是维生素E的50倍，是维生素C的20倍。花色苷作为无毒、高效的天然抗氧化剂，在保健食品及饮料中广泛应用，成为美国天然植物提取物十大畅销品种之一，有着广阔的市场。除了极强的抗氧化能力外，它还可以降低心脏病、癌症、糖尿病的发病率，增强血管壁抵抗力，降低毛细血管脆性，保持毛细血管通透性，预防并缓解静脉曲张，减轻水肿和腿部肿胀。同时还能增强机体免疫能力，抵御外来病原体入侵。

山竹是一种重要的热带水果，其果皮占果实总重量的70-80％左右，常常被作为废弃物扔掉。充分利用这一废弃资源，研发抗炎新药，具有广阔的应用前景。

目前有关山竹果皮中花色苷的提取及其药物用途未见报道。

发明内容

本项发明目的是提供一种从山竹果皮中分离提取出天然花色苷成分的方法，通过体内、体外炎症模型，确证针对P-选择素靶点，山竹果皮花色苷的抗炎效果，将其应用于制备预防和治疗炎症及相关疾病的药物之中。

本发明涉及到山竹果皮花色苷的分离提取方法、体内急性腹腔炎小鼠模型、体外模拟毛细血管层流实验等相关内容。

本发明采取山竹果皮花色苷的分离提取方法是：

先将山竹果皮风干后粉碎，利用酸性乙醇提取，提取液减压浓缩后，加水溶解加样到XAD-7大孔树脂中，分别用水、乙醇洗脱，收集乙醇部分，浓缩后，加水冻干，得到总花色苷成分，样品呈现紫红色粉末状。

利用急性腹腔炎小鼠模型检测山竹果皮花色苷的抗炎活性，结果表明尾静脉注射山竹果皮花色苷后能够有效抑制小鼠腹腔液中性粒细胞渗出，在剂量为0.01、0.1、1mg/ml时，抑制率分别达到了34％、77％、94％。此外，构建稳定转染P-选择素的CHO细胞系(CHO-P)，利用体外模拟毛细血管的层流实验，模拟生理条件下炎症部位活化的血管内皮细胞表面的P-选择素介导的白细胞与血管内皮的粘附作用。通过层流模型研究发现，0.01、0.1、1mg/ml剂量的山竹果皮花色苷在层流条件下对中性粒细胞的粘附抑制率分别达到45％、71％、89％。

本发明在分子水平、细胞水平和整体水平上，确证了山竹果皮花色苷的抗炎活性，山竹果皮花色苷作为新型抗炎药物有着良好的应用前景。

附图说明

附图1为山竹果皮花色苷对小鼠急性腹腔炎的抑制作用示意图；

附图2为山竹果皮花色苷对中性粒细胞与CHO-P在层流状态下结合的抑制作用示意图。

具体实施方式

实施例1：

山竹果皮花色苷的分离提取：