[发明专利]fengycin类脂肽对镰刀菌抗性作用强弱的测定方法

权利要求书

1.一种fengycin类脂肽对镰刀菌抗性作用强弱的测定方法，其特征在于：采用平板抑菌实验进行操作，通过比较fengycin类脂肽作用于镰刀菌而产生的色素圈直径的方法来衡量抗生素抗性强弱。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述平板抑菌实验为杯碟法、打孔法或滤纸片法。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所用指示菌为产色素镰刀菌。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：

具体操作过程：

1)目标菌株的初培养：将带有新鲜的镰刀菌菌株的6mm-8mm的圆形菌块，放置于无菌PSA平板中央，于28-30℃培养24-48h，这段时间是镰刀菌生长的适应阶段；

2)加牛津杯或滤纸片：将牛津杯放置在菌块四周，加入配置好的待测fengycin溶液；或将载有fengycin的滤纸片贴在菌块周围；或于菌块周围打孔，于孔内放入fengycin溶液；

孔、牛津杯或滤纸片距离菌块外沿约1.5-2cm，以无菌水或溶解fengycin的溶剂作为阴性对照；

3)抗性测定：将经步骤2处理过的平板于15-25℃再培养4-9天，直至菌体长满平板，在该温度范围内镰刀菌菌丝体会迅速扩散且产生的干扰性色素少，此时可以观察到有抗性作用的fengycin所在的孔、牛津杯或滤纸片边缘会产生明显的色素圈，此时镰刀菌可能本身也会产生一定色素，但fengycin周围的色素圈会较正常菌丝所产色素的颜色深，所以色素圈边缘仍旧很清晰，此时用游标卡尺可轻易测量该色素圈直径；

抗性作用强弱的衡量：浓度越大，色素圈直径越大，不同种fengycin在同浓度同载样量下，色素圈直径越大，抗性作用越强。

5.按照权利要求1或4所述的方法，其特征在于：所述抗生素为fengycin类脂肽，或其他作用于生物膜，能够引起膜破裂导致指示菌色素释放的抗生素。

6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：所述fengycin溶液的浓度为10μg/ml-2mg/ml，溶剂为水或PBS缓冲液。