[发明专利]试管内诱导草莓匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒方法

说明书

技术领域　

本发明涉及一种植物栽培方法，即一种试管内诱导草莓匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒方法。 

背景技术

在现有技术中，草莓(Fragaria chiloensis. Duch. Bail.)是蔷薇科多年生草本植物，近几年，我国草莓生产发展迅速，草莓的面积和产量已跃居世界首位。但由于栽培草莓都是通过无性繁殖，病毒侵染之后，随同无性繁殖材料传播扩散，因此无性繁殖数量越大，病毒传播速度也越快，通过几年的栽培后，受病毒的危害，引进的品种果实变小、品质变劣、产量降低等退化现象普遍发生，造成草莓产量的减少，一般减产30％左右，复合侵染时损失更大。草莓病毒病是由草莓感染病毒而发生的病害，在栽培上表现出黄化型和缩叶型两种症状类型，草莓病毒病危害面广，据不完全统计，草莓病毒的种类多达60多种，其中草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus，SmoV)、草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus，SMTEV)、草莓镶脉病毒(Strawberry vein band virus，SVBV)和草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus，SCrV)是侵染我国草莓的4种主要病毒，总侵染率为80%以上，其中单病毒的侵染率达40%以上，两种以上病毒的复合侵染率达38%以上。由于病毒病具有潜伏侵染的特性，植株不能很快表现症状，所以在生产上常被忽视。近年来病毒的危害已越来越受到育种学家的重视，成为草莓生产上急需解决的问题。我国的草莓脱毒技术起步较晚，目前还不能满足生产要求。目前，国内外利用生物技术等手段进行定向选育抗逆性强的新品种，本课题组在前人研究的基础上，开展了长白山野生深山草莓(别名绿叶东方草莓)[Fragaria orientalis Lozinsk. var.concolor(Kitag.) Liou et C. Y. Li]花瓣诱导再生植株和变异植株的研究，以期获得具有优良性状和的抗逆性强的草莓新品种。通过近十余年试验和栽培观察，获得了6个遗传稳定的优良株系，又从这6个优良株系种确定了1个优质、丰产及抗病力强，并可用于生产和推广的新品种，暂定名为“长白1号”，栽培2年后发现该品种草莓植株严重矮化，叶片产生不规则黄色斑点，扭曲变形，匍匐茎数量逐年减少，繁殖率下降，果实变小，大幅度减产等现象。经检测该品种感染了草莓斑驳病毒和草莓皱缩病毒。草莓脱毒研究大多集中在茎尖脱毒、花药培养脱毒、高温处理和药处理等方面，但均很难达到100%的脱毒率，茎尖脱毒采用0.30 mm的茎尖，但0.3 mm的茎尖脱毒效果虽好，但成活率低且达不到完全脱毒，而且剥离茎尖难度大，操作易被污染，所需时间较长，工作效率低。

发明内容

本发明的目的是针对上述不足而提供一种脱毒效果更好的试管内诱导草莓匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒方法。

本发明的技术解决方案是：试管内诱导草莓匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒方法包括草莓的试管苗在试管内培养基诱导匍匐茎，培养温度(22±2) ℃，培养33～45 d(天)；然后将带有匍匐茎的试管苗在培养瓶中于温度为50～56 ℃的恒温培养箱中进行80～85 d高温培养处理后，再切取0.5～1.0 mm的茎尖在培养基中进行茎尖愈伤组织诱导，温度(24±2) ℃，培养28～35d；然后将茎尖愈伤组织转接到培养基进行愈伤组织芽苗再分化培养，温度(24±2) ℃，培养30～40d得再生芽苗。将再生芽苗进行病毒检测，草莓斑驳病毒和皱缩病毒脱毒率达100%。生根、移栽成活率达97% 以上。

优选方案是：试管内诱导草莓匍匐茎和高温处理结合茎尖培养脱毒方法包括草莓的试管苗在试管内培养基诱导匍匐茎，培养温度22℃，培养45 天；然后将带有匍匐茎的试管苗在培养瓶中于温度为56 ℃的恒温培养箱中进行85 天高温培养处理后，再切取1.0 mm的茎尖在培养基中进行茎尖愈伤组织诱导，温度24℃，培养30天；然后将茎尖愈伤组织转接到培养基进行愈伤组织芽苗再分化培养，温度24℃，培养35天得再生芽苗。

所述试管内培养基为LS+6-BA1.00 mg·L^-1+GA₃1.90 mg·L^-1+KT1.00 mg·L^-1。