[发明专利]一种降低血总胆固醇的免疫调节剂及其给药方式

说明书

技术领域

本申请涉及心血管疾病领域。具体地说，本发明涉及牛结核分枝杆菌热休克蛋白65及含有完整牛结核分枝杆菌热休克蛋白65的蛋白组合物在治疗和/或预防动脉粥样硬化中的应用。

背景技术

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是常见的心血管疾病之一，也是现代死亡率最高的疾病之一。动脉壁上大量脂质的积聚是动脉粥样硬化的主要表征，它同时也是一种慢性炎症过程，天然免疫和适应性免疫反应不仅参与动脉粥样硬化斑块的形成，而且侵蚀动脉壁，降低动脉弹性，影响血液流动。动脉粥样硬化斑块往往使动脉管腔变窄，进一步诱发血栓栓塞，造成局部缺血，有时还会导致血流灌注区的组织萎缩。严重后果包括缺血造成的心绞痛、心衰竭。

HSP65/60分子属于HSP60家族，分子量60kDa左右，是生物体应对外界刺激发生反应而表达的应激蛋白，在进化上高度保守。人源HSP60和结核分枝杆菌HSP65大约具有50％的同源性。当病原体侵入时，机体的免疫系统针对病原体产生抵抗性的免疫应答，这时针对菌源HSP65的免疫反应赋予机体抗感染的能力，但同时由于人源HSP60和微生物源HSP65分子的高度同源性，免疫系统在识别菌源HSP65的同时也可能针对自身的HSP60产生应答，这种交叉免疫反应使得HSP65/60分子成为了一种危险的自身抗原。以往的研究证明HSP65/60分子是AS的一个主要自身抗原。在AS患者或AS模型动物血清中都检测到针对HSP65/60的抗体，抗体滴度与疾病的严重程度呈正相关。在AS斑块中也检测到大量针对HSP65/60的T细胞。覆盖有AS斑块的血管内皮处存在大量表达HSP60的内皮细胞、巨噬细胞和平滑肌细胞。在用重组HSP65或含有HSP65的卡介苗免疫动物时发现可明显促进AS的发生。抗HSP65/60分子的抗体被证明对内皮细胞和巨噬细胞具有直接的损伤作用，这种细胞毒性很可能诱导和加速了AS。

随着对HSP65/60与AS关系研究的深入，人们开始尝试用HSP65/60分子开发自身抗原疫苗来预防AS的发生。当AS发生时，机体内可以检测到Th1型细胞因子γ-干扰素(interferon-γ，IFN-γ)、白介素(interleukin，IL)-12的升高，同时伴随Th2型细胞因子IL-4、IL-5和IL-10的降低。因此AS被认为是一种Th1型免疫应答过于亢进而造成的自身免疫性疾病，针对这种Th1偏向性的自身免疫性疾病，预防和治疗的原则应当以抑制Th1型免疫应答为首要任务。通常有两种方法：一是诱发免疫耐受，即诱导针对自身抗原的全面无应答状态；二是诱导免疫应答由Th1向Th2漂移，即诱导体内针对自身抗原的免疫调节反应，使得Th2型应答上调，利用Th2型应答对Th1型应答的抑制能力来达到预防疾病的目的。这两种方法都被广泛地应用于自身免疫性疾病的预防，但从免疫途径和免疫策略上两者并没有特定的区别，主要还是与具体的疾病和抗原有关。

在AS的预防上，已有实验证明鼻腔或口服免疫HSP65分子可以抑制低密度脂蛋白受体缺陷型(low-density lipoprotein receptor deficient，LDL-RD)小鼠上AS的发生，这主要是通过抑制Th1偏向性免疫反应达到的。

血脂异常是诱发AS的传统危险因素之一，研究发现血脂异常除了与饮食、遗传相关外，感染、炎症等因素也会导致血脂异常。感染、炎症导致的急性时相反应(acute-phase response，APR)可以影响体内脂质和脂蛋白的代谢：升高甘油三酯水平、促进肝脏脂肪酸和胆固醇合成、抑制脂肪酸的氧化、降低脂蛋白脂肪酶活性、降低LDL的清除率、抑制胆固醇的逆向转运等等。这些变化可能是由感染过程中所分泌的炎症性细胞因子所介导产生的，而脂质代谢的异常最终促进了AS的发展。Xu等人用HSP65混合佐剂皮内免疫新西兰大白兔，在观察到AS斑块程度加重的同时也发现了家兔血清中胆固醇水平的升高，这说明HSP65相关的炎症性免疫应答也可以对动物的血脂代谢造成影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种降低血清总胆固醇的免疫调节剂

本发明的又一目的是提供该免疫调节剂的给药途径及剂量

本发明的最终目的是公开该免疫调节剂的用途

在本发明的第一方面，提供牛结核分枝杆菌热休克蛋白65(表示为HSP65，国际基因库登录号是M17705)作为降低低密度脂蛋白-胆固醇的免疫调节剂。作为本发明的第一个实施实例，本免疫调节剂是利用基因工程手段通过可溶性表达而获得的HSP65，步骤包括：

(1)HSP65基因的设计与获得