[发明专利]一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测牛血清白蛋白含量的方法，特别是一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法。

背景技术

牛血清白蛋白是含581个氨基酸残基的多肽，理论计算的分子量为68kD，等电点为4.8。含氮量16％，含糖量0.08％，仅含己糖和己糖胺，含脂量只有0.2％。它由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，使分子呈9段弯曲，形成3个等体积的球状，在肽链的第34位有一自由巯基。牛血清白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。牛乳总蛋白中有1％-2％的蛋白为牛血清白蛋白，通过细胞间结合处进入牛乳，不具有特殊生理功能，但在乳成分分析检测领域中有重要作用。牛血清白蛋白在牛血液中约占50％，血液中的牛血清白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。

目前，国内外检测牛血清白蛋白主要方法为ELISA法、凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法、紫外吸收法和考马斯亮蓝法。这些方法均有操作复杂、时间较长、准确度低等缺点。鉴于以上方法的缺点，本发明提供了一种利用毛细管电泳技术快速检测牛血清白蛋白含量的方法。高压毛细管电泳分析仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离设备。它能快速精确检测出牛乳中的微量蛋白。该方法操作简便、准确，检测到出结果时间仅为1h左右。

目前，毛细管电泳技术逐渐应用到乳品领域里，如产品开发和控制质量问题等，但毛细管电泳技术尚未开发检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法。本发明成功弥补了乳品领域中的缺点，能准确测定牛血清白蛋白的含量，且检出率高，从而有利于牛乳的分析检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法，该方法所使用的样品缓冲液其刺激性气味小、毒性低，且该方法检出率高、检测结果更加准确。

本发明提供了一种检测牛乳中牛血清白蛋白含量的方法，该检测方法采用高压毛细管电泳分析仪进行检测，包括如下步骤：

(a)配制不同浓度的牛血清白蛋白标准溶液，根据标准溶液，制定牛血清白蛋白浓度与高压毛细管电泳分析仪输出的牛血清白蛋白的峰面积之间对应关系的标准曲线；

(b)在高压毛细管电泳分析仪中以与标准溶液相同的高压毛细管电泳分析仪的检测参数检测待测牛乳；

(c)利用得到的标准曲线和待测牛乳的检测结果，确定待测牛乳中牛血清白蛋白的含量。

在本发明的再一种具体实施方式中，标准溶液的浓度在8mg/ml至0.01mg/ml之间。

在本发明的另一种具体实施方式中，标准溶液的浓度在4mg/ml至0.01mg/ml之间。

在本发明的还一种具体实施方式中，标准溶液的浓度分别为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml和0.01mg/ml。

上述检测方法的步骤(a)中制定标准曲线时，标准溶液的检测条件为：精确提取标准溶液加入样品管中，超声波清洗0.5至15min后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述检测方法的步骤(b)中待测牛乳的检测条件为：装入10ml至50ml的离心管中，在1500至6000r/min的离心条件下离心6至10min，离心温度在4至25℃之间，得到检测样品，在检测样品中按1∶1至1∶20的体积比加入样品缓冲液，摇匀之后精确提取10至200μl加入样品管中，超声波清洗0.5至15min后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述样品缓冲液能够使蛋白质分散，它是在1体积份的150至170mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加入浓度为50至70mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、5至7mol/L的尿素、1至5mg/ml的二硫基苏糖醇、0.01％至0.5％(即1至50mg/ml)的甲基羟乙基纤维素，加入的所述乙二胺四乙酸二钠、尿素、二硫基苏糖醇、甲基羟乙基纤维素的体积份相同，均为1至20体积份，pH值为8.5±0.5。

上述高压毛细管电泳分析仪的检测参数为：检测温度在15至45℃之间，毛细管柱直径在20至80μm之间、长度在150至700mm之间，紫外光检测器的进样压力在0.5至2psi之间，进样时间在1s至25s之间，分离温度在15至45℃之间，工作电压在7至30kV之间。

上述毛细管柱是涂层或未涂层的。

上述高压毛细管电泳分析仪中电泳缓冲液的pH值在2.0至3.0之间，主要成分为柠檬酸。

上述检测结果的处理方法如下：检测结果为样品分离的图谱，运用高压毛细管电泳分析仪所带的分析软件，积分各峰的面积，计算出试样浓度，再乘稀释倍数，即得实际浓度。