[发明专利]一种在线低、中、高压结合的二维制备液相色谱系统

说明书

【技术领域】

本发明涉及制备液相色谱系统领域，具体地说，是一种在线低、中、高压结 合的二维制备液相色谱系统。

【背景技术】

制备液相色谱是以获取纯样品为目的的一种分离技术，自20世纪30年 代应用于色素的分离至今，得到了长足发展。20世纪80年代高效制备液相色 谱在医药工业中有了迅速的发展，90年代在蛋白的分离纯化上得到大量应用。 如今，制备色谱几乎在社会生产生活的各个领域均有应用，如次生类代谢产 物、天然产物、大分子化合物及某些重要的药用生物活性蛋白、生物治疗品 与诊断试剂的分离纯化。但是，与分析色谱相比，制备液相色谱分离效率不 高，不能满足高纯度、高产量的需求。于是，人们致力寻找一种高分离效率 的制备色谱模式，降低生产成本，得到高纯的样品。进样量与分离效率是液 相制备色谱的两个重要指标，而进样量增加，会降低分离效率。为了同时兼 顾进样量和分离效率，曾有人提出将一根大内径柱与一根小内径柱串联，其 认为前面大内径柱能提供大的柱容量，后面小内径柱提供有效的分离。但是 结果表明该方法不是一个有效的途径。2005年，关亚风等发明了一种内径逐 渐缩小的锥形柱。此内径逐渐缩小的锥形柱，选择合适的锥角，使色谱谱带 流型接近筛子状流型，其上样量大同时能有效提高柱效。但是该色谱柱提高 的柱效有限，对一些复杂物质分离效果不尽人意。

二维液相色谱(2D-LC)是将相互独立的两支色谱柱串联起来构成的分离 系统。样品经过第一维色谱柱分离后进入切换接口中，通过接口的富集、浓 缩以及切割后进入第二维色谱柱继续分离。在一维系统中不能完全分离的组 分，有可能在二维系统中得到较好的分离，因此整个二维系统的分离能力， 系统分辨率、峰容量较一维色谱系统得到了大大提高。在制备色谱中，有人 首先将样品用低压制备液相色谱粗分，将收集的洗脱液浓缩后，再以中、高 压液相色谱分离。这种方法操作复杂费时费力，且浪费大量溶剂，生产成本 高。至今，还没有人将低、中、高压制备液相色谱系统结合构建在线二维制 备液相色谱系统，用于规模化制备生产。

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种在线低、中、高压结 合的二维制备液相色谱系统。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种在线低、中、高压结合的二维制备液相色谱系统，包含第一维分离 系统和第二维分离系统；第一维分离系统与第二维分离系统通过六通阀进行 连接；第一维分离系统使用低或中压制备液相色谱系统，第二维分离系统使 用低、中、高压制备液相色谱系统；第二维系统使用的压力不低于第一维分 离系统；

当第一与第二维分离系统均为低压或中压制备液相色谱系统时：六通阀1 号位通过三通与第一维色谱柱出口端及其检测器相连，4号位与第二维色谱柱 进口端相连，5号位与第二维输液泵相连，2、3号位通过外管路相连，6号位 外接废液收集装置；初始状态六通阀1与6、2与3、4与5号位相通，第一 维分离系统的检测器对样品分离情况进行实时监测，当目标物从第一维分离 系统中洗脱下来时，切换六通阀，使得1与2、3与4、5与6号位相通，目 标物直接进入第二维色谱柱；然后再次切换六通阀，使其恢复初始状态，后 于目标物洗脱的物质进入废液收集装置，同时进行第二维分离；分离后的样 品经检测器检测确认后进行收集。

当第二维分离系统使用的压力高于第一维分离系统时：六通阀1号位通 过三通与第一维色谱柱出口端及其检测器相连，4号位与第二维色谱柱进口端 相连，2、5号位之间接一捕集柱，3号位与第二维输液泵相连，6号位外接废 液收集装置；初始状态六通阀1与6、2与3、4与5号位相通，第一维分离 系统的检测器对样品分离情况进行实时监测，当目标物从第一维分离系统中 洗脱下来时，切换六通阀，使得1与2、3与4、5与6号位相通，目标物吸 附于捕集柱柱头；然后再次切换六通阀，使其恢复初始状态，将目标物冲洗 入第二维色谱柱，进行第二维分离；分离后的样品经检测器检测确认后进行 收集。