[发明专利]一种构建人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型的方法及其专用诱发剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种构建人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型的方法及其专用诱发剂。

背景技术

卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤，发病率仅次于宫颈癌和子宫体癌，但其死亡率却占妇科肿瘤首位。近年来卵巢癌发病率出现逐渐增高的趋势，严重影响女性健康。卵巢癌病程隐匿，缺乏有效的早期诊断方法，发现时多数患者已近晚期。常规的手术、化疗和放疗虽然可以缓解症状，但难以提高患者的生存率。分子生物学和肿瘤免疫学研究为卵巢癌的细胞生物治疗提供了理论基础和技术方法。但细胞治疗用于临床前须进行安全性及有效性评价，卵巢癌动物模型尤为重要，特别是能够反映卵巢癌病理发展过程及临床特征的人鼠嵌合模型。自1969年Rygaard等进行裸鼠异种移植入恶性肿瘤获得成功以来，裸鼠已成为人们研究恶性肿瘤生物学特性的工具。近年来，已有研究报道了裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型(张长英，成文彩.人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立[J].武汉科技大学学报(自然科学版).2001，24(1)：99；高国兰，邹春芳，等.人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及生物学性状的鉴定.实用癌症杂志，2004，19(5)：454-457)。但皮下移植瘤模型不能很好的反应卵巢癌的病理进展，所以进一步应用受到了很大的限制。张殊等人将高转移性人卵巢癌细胞(Ho-8910PM)制成悬液注入裸鼠皮下，获得皮下移植瘤，然后取瘤组织块进行卵巢原位移植，经过77天观察移植物出现转移(张殊，林其德，狄文，卵巢癌原位移植-转移动物模型的建立，中华妇产科杂志，2004，39(12)：835-837)。但建立该模型存在以下的问题：裸鼠卵巢较小，无论是接种还组织块移植均很困难且周期较长，并且种植于“原位”即卵巢上皮内，技术难度较大，限制了该模型的应用范围。另有研究报道，将抽取临床卵巢癌患者的腹水直接注入裸鼠腹腔(陈爱平，王和，彭芝兰等，人卵巢癌裸鼠移植瘤和腹水瘤模型的建立及形态学观察，肿瘤，2001，21(2)：82-84)，属于原代移植，成瘤潜伏期长，移植物获取存在一定的困难。综上所述，构建既符合卵巢癌临床特征，又便于实验观察和分析的人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型已成为亟需解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于构建人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型的诱发剂。

本发明所提供的用于构建人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型的诱发剂，由Ho8910细胞和1640培养基组成，每支诱发剂的体积为0.2ml，每支诱发剂中Ho8910细胞的数目为2×10⁶个，每支诱发剂对应一只3-5周龄的鼠一次使用完毕。

上述诱发剂中，每1升所述1640培养基是按照如下方法配制的：将10.4克1640干粉培养基和2.0克NaHCO₃溶于水中，调节pH值为7.2，用水定容至1升，得到1升1640培养基。

上述诱发剂中，所述鼠为BALB/C裸鼠。

本发明的另一个目的是提供一种构建人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型的方法。

本发明所提供的构建人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型的方法，包括如下步骤：将上述任一所述诱发剂腹腔注射于3-5周龄的鼠，得到接种Ho8910细胞的鼠，将所述接种Ho8910细胞的鼠饲养25-45天，至所述接种Ho8910细胞的鼠具备如下(1)和(2)性状，得到人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型：

(1)[(接种Ho8910细胞的鼠腹围-未接种Ho8910细胞的鼠腹围)/未接种Ho8910细胞的鼠腹围]＞10％；(2)接种Ho-8910细胞的鼠腹部触及瘤体。

上述方法中，所述饲养的条件为：SPF级环境、温度22℃、湿度55％和12小时昼/夜节律。

上述方法中，所述鼠为BALB/C裸鼠。

本发明通过腹腔注射给裸鼠特定数量的卵巢癌细胞，构建了模型。实验证明，裸鼠接种后25-45天100％成瘤；腹部可触摸到肿瘤结节，腹围增加，腹水量为2-6ml，平均为3.5ml，涂片可见肿瘤细胞；接种后平均生存活时间为60.4天。解剖成瘤鼠，腹腔可见实体瘤组织，并有肿瘤组织附着于肠、肝、脾等器官；病理检查见肝、脾等脏器存在肿瘤细胞浸润，肿瘤组织为人卵巢低分化浆性腺癌。本发明所构建的人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型具有成瘤率高、成瘤潜伏期短、模型性状显著且稳定、平均生存时间较长特征。而且本发明小鼠模型的发病情况极类似于人类的卵巢癌中晚期症状，说明本发明模型成功的模拟了于人类卵巢癌的中晚期发展过程。该模型的建立为系统性研究卵巢癌生物学行为、进行细胞治疗以及筛选新药及疗效观察等研究提供了强有力的工具。

附图说明

图1.成瘤后裸鼠图片。