[发明专利]一种X-STR基因座荧光标记复合扩增体系及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测人体基因组中具有多态性的遗传标记，尤其涉及 X染色体遗传标记技术，具体涉及一种X-STR基因座荧光标记复合扩 增体系及其应用。

背景技术

短串联重复序列(short tandem repeats，简称STR)是由2～7个碱 基对作为核心单位，串联重复形成的一类微卫星DNA序列，其片段 可采用PCR技术扩增。STR主要由于核心重复单位数目的变化形成了 STR基因位点的遗传多态性，其等位基因可用银染、荧光标记和放射 自显影等技术分型。人类基因组中，平均每6～10kb就存在有一个STR 基因位点，为法医个人识别和亲子鉴定提供了高信息基因位点的丰富 来源。

X染色体是人类性染色体，X染色体短串联重复(X-chromosomal  Short Tandem Repeat，X-STR)是性染色体上一类多态性遗传标记， 男性的X-STR以单倍型形式存在只能从其母亲中得到，且只能遗传给 女儿，因此同父所生的姐妹在X-STR基因座上有1个相同的等位基因， 孙女X-STR基因座有1个等位基因与其祖母相同。X染色体这种独特的 遗传方式，使得X-STR在亲缘鉴定中有特殊的应用价值。

在亲缘鉴定中，有些没有父母双亲参与检测的特殊案件，如：姐 妹认亲、同父异母的半同胞姐妹认亲、隔代认亲(祖母-孙女)等， 用常染色体、Y染色体或线粒体的遗传标记无法排除或认定，此时只 有依靠X染色体STR才能起到直接排除或认定的作用。

此外在有先天性缺陷的遗传病中，可通过检测X染色体STR来 诊断有无X染色体多倍体、X染色体重复、X-STR重复序列长短等， 同时，X染色体STR检测可应用于X连锁遗传病、X染色体单亲二 倍体、X染色体失活的亲源性等鉴定。从而为伴X染色体遗传病提 供产前诊断方法。

因此，可以通过分析X染色体上的STR基因座的等位基因分型 来确定亲缘关系和用于伴X染色体遗传病的产前诊断。

X染色体STR位点广泛存在真核细胞基因组中，高度稳定且具有 较高的遗传多态性，然而与常染色体和Y染色体STR相比，迄今发现 和应用的X-STR位点数量较少，群体分布、突变率、连锁平衡、基因 结构等方面的信息尚不够丰富，在法医学、医学等领域的应用受限， 远不及其他DNA遗传标记广泛。

X染色体遗传标记的研究在国内还处于初期，目前国际上商品化 检测试剂盒仅有德国Argus X-8和Argus X-12，该类试剂盒 在法医学应用实践中存在以下问题：

(1)采用这类试剂盒需要增加遗传标记时遇到困难；

(2)这些X-STR基因位点都是基于中国群体以外的群体(主要 是白人群体)资料而开发的，其中有些基因位点，在中国群体的基因 频率分布较差，个人识别能力较低；

(3)国外商品化试剂盒价格昂贵。

这些缺点限制了X染色体遗传标记在国内的应用，不利于进一步 在基层推广。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种适合于中国人 群的，可以快速、方便针对常染色体STR、Y-STR难以排除或认定亲 缘关系的特殊检案(姐妹认亲、同父异母的半同胸姐妹认亲、隔代认 亲等)进行鉴定的X-STR基因座荧光标记复合扩增体系。

本发明的另一个目的在于提供上述X-STR基因座荧光标记复合 扩增体系在为伴X连锁遗传病、X染色体单亲二倍体、X染色体失 活的亲源性鉴定等提供产前诊断，以及姐妹认亲、同父异母的半姐妹 认亲、隔代认亲等亲缘鉴定中的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

一种X-STR基因座荧光标记复合扩增体系，该复合扩增体系共包 含14个基因座：DXS7133、DXS6801、DXS981、DXS6809、DXS7424、 DXS6789、DXS9898、DXS7132、GATA165B12、DXS101、DXS10075、 GATA31E08、DXS10074和DXS10079。

本发明对上述14个X-STR基因座进行了研究，表明这14个基因座 在中国人群中有高度的遗传多态性和良好的等位基因频率分布。

一、本发明复合扩增体系中14个基因座的选择

(1)位于同一连锁群内