[发明专利]一种靶向肿瘤的双基因重组腺相关病毒载体

权利要求书

1.重组腺相关病毒载体，其中沿着腺相关病毒的转录方向可操作地连接有SEQ ID NO：9所示的外源基因，所述外源基因是编码反向连接的Caspase3大小亚基的基因和内皮抑素基因，其基因连接顺序为5’-Caspase3小亚基编码基因-Caspase3大亚基编码基因-IRES编码基因-内皮抑素编码基因-3’。

2.含有权利要求1的重组腺相关病毒载体的宿主细胞。

3.含有权利要求1的重组腺相关病毒载体的组合物，其中还含有药学允许的赋形剂。

4.制备权利要求1的重组腺相关病毒载体的方法，包括步骤：

(a)用基因工程方法构建质粒pAAV-Rev-Caspase3-IRES-Endostatin，其包含大小亚基反向连接的Caspase3和内皮抑素基因，其基因连接顺序为Caspase3小亚基-Caspase3大亚基-IRES-内皮抑素基因；

(b)将(a)中构建的质粒pAAV-Rev-Caspase3-IRES-Endostatin和辅助质粒共转染包装细胞；

(c)收获(b)中的细胞，依照常规方法获得重组病毒载体rAAV-Rev-Caspase3-IRES-Endostatin。

5.权利要求4的方法，其中所述的辅助质粒可以是pSH3、pAAV-RC和pHelper，优选pAAV-RC和pHelper两种质粒。

6.权利要求4的方法，其中所述的转染方法可以是电穿孔法、显微注射法、基因枪法、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、多种阳离子物质或病毒介导的转染方法，优选磷酸钙共沉淀法。

7.权利要求4的方法，其中所述的包装细胞是人胚肾细胞HEK293或者金黄地鼠胚胎肾细胞BHK-21，优选人胚肾细胞HEK293。

8.权利要求1的重组腺相关病毒载体在制备肿瘤治疗药物中的用途。

9.权利要求1中的重组腺相关病毒载体用于抑制肿瘤生长的用途。

10.根据权利要求9和10的用途，其中的肿瘤包括肝癌、胰腺癌、胆管癌、肺癌、肾癌。