[发明专利]防治辣椒青枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料

说明书

一、技术领域

本发明涉及能防治辣椒青枯病的拮抗菌及用其制成的微生物有机肥料，属于农业集约化生产技术领域，专用于克服和消除辣椒青枯病问题。

二、背景技术

辣椒青枯病是由青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种土传病害，一旦发生，通常造成20％-30％的辣椒死亡，严重时高达50％以上，甚至绝收。目前，对辣椒青枯病的防治主要有作物轮作、化学防治和选育抗病品种等不同的方法，但防治效果较低。随着绿色农业的发展，对辣椒青枯病的防治重点逐渐转向以生物防治为主的综合防治，筛选高效拮抗菌株是进行生物防治的核心，同时将拮抗菌株和有机肥复配开发成既能够抗病又可以改善土壤结构的微生物有机肥料越来越受到人们的重视。

三、发明内容

1.技术问题

本发明的目的在于研制一种能防治辣椒青枯病的拮抗微生物有机肥料，防治效率达到70％，使大量辣椒连作障碍土壤得到生物修复，确保集约化农业的顺利发展。

2.技术方案

用于防治辣椒青枯病的拮抗菌a45，属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，2009年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3480，主要生物学特性为；革兰氏染色阳性G⁺，细胞形状为杆状，芽孢中生或近中生，椭圆形，孢囊不膨大，没有伴孢晶体；发酵葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、甘露糖、甘露醇产酸，能水解淀粉和液化明胶，接触酶、柠檬酸盐利用、硝酸盐还原反应、V-P(Voges-Proskauer)反应均为阳性，而甲基红反应、丙二酸利用、酒石酸盐利用均为阴性；在LB平板上30℃培养24h后，菌落周边不规则，不透明，具运动性。

用上述拮抗菌a45所生产的防治辣椒青枯病的微生物有机肥料，其特征在于：该肥料中含有2.0×10⁹个/g以上的拮抗菌a45、全氮含量为33.1g kg^-1，全磷含量为13.3g kg^-1、全钾含量为21.3g kg^-1。

上述防治辣椒青枯病的微生物有机肥料的生产方法，包括：

1)将菌株a45接种到PDA培养液中进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH范围为7.0-7.2，培养温度30℃，170转/分钟，发酵中后期形成芽孢，发酵的a45拮抗菌液含菌或芽孢量≥5×10⁹个/ml；所用PDA培养液配制方法为，以配制1L培养基为例：用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30min，经过滤后滤液中加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值调至7.2-7.4，121℃灭菌20min。

2)有机肥的制备：以腐熟的猪粪堆肥、腐熟的牛粪堆肥、氨基酸有机肥以体积比3∶3∶4混合制成；所用腐熟的猪粪、牛粪堆肥发芽指数均为98％以上，有机质质量比含量≥35％，有机氮质量比含量为1.2-2％，含水量25-30％。

3)将a45拮抗菌液按20％(V/W)的比例接种到步骤2)所述有机肥中进行固体发酵，发酵温度为30-50℃，发酵过程中每天翻堆1次，发酵周期5-7天，使拮抗菌含量达到2.0×10⁹个/g以上，最后在温度不超过60℃的条件下将其含水量蒸发至30％以下，包装出厂即为防治辣椒青枯病的微生物有机肥料。

所述微生物有机肥料可专用于防治辣椒青枯病。

3.有益效果

本发明涉及一种能克服或消除连作辣椒青枯病的微生物有机肥料及其生产方法，利用猪粪堆肥、牛粪堆肥和氨基酸有机肥混合物，再与拮抗菌液混合后制成微生物有机肥料，其产品与目前市场上的产品相比具有如下优点：

1)该肥料产品中含有抑制辣椒青枯病病原细菌生长的专一性高效菌株(枯草芽孢杆菌a45)，其抑制效果非常显著。试验结果表明，在含有辣椒青枯病的土壤上施用本产品后，辣椒青枯病的生物防治率高达70％以上。

2)该肥料为有机肥，含有丰富的有机质，而且大部分为氨基酸和小分子多肽。有机肥料中含有的丰富营养也为其中的拮抗菌提供了生长繁殖的条件，使其在土壤中存活下来并形成优势种群，从而发挥防病作用。

3)由于是生物菌株制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于辣椒的无公害生产，农民可以不用或减少防治青枯病的化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于农产品的出口。同时，该微生物有机肥料还有增产功能，可为农民增加收入。

四、附图说明

图1施用拮抗菌a45和微生物有机肥对辣椒根系病原菌的影响