[发明专利]一种纳米微球免疫比浊法检测α1-微球蛋白的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于测定血清成份的试剂盒，特别是测定血清中的α1-微 球蛋白(α1-MG)的试剂盒，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。

背景技术

α_1--微球蛋白(α₁-MG)主要在肝脏和淋巴细胞组织中合成，广泛分布于 体液及淋巴细胞膜表面的一种糖蛋白，分子质量27KD，在血液中α₁-微球蛋白 有游离和与IgA结合等等种形式；正常情况下，血液中游离α₁-微球蛋白可自由 通过肾小球滤过，并在近曲小管被重吸收，因此尿中含量极微。而结合IgA的 α₁-微球蛋白则不能通过肾小球滤过。由于α₁-微球蛋白的产生量恒定，较少受 肾外因素影响，因此测定α₁-微球蛋白浓度对肾功能损伤具有早期诊断意义。

已知测定α₁-微球蛋白(α₁-MG)的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射 免疫分析法、酶联免疫法(ELISA法)，这些方法存在着操作繁琐，需要特殊的 设备，样本需要预处理，不能进行批量样本分析和不能直接上全自动生化分析 仪检测等缺点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述背景技术的不足，提供一种α₁-微球 蛋白检测试剂的改进，所提供的试剂应具有样本无需稀释、操作简单、准确度 高、重复性好，适用于各种类型的全自动生化分析仪的特点。

本发明提供的技术方案是：

一种纳米微球免疫比浊法检测α1-微球蛋白的试剂盒，包括试剂R₁、试剂 R₂以及参考校准品，其中：

a、试剂R₁：一种使样本中α₁-微球蛋白抗原位点充分暴露，有利于与抗α ₁-微球蛋白抗体试剂充分结合的α₁-微球蛋白溶液，包括5-200mmol/L缓冲液、 0.5-5mmol/L的稳定剂、50-200mmol/L电解质、0.1-4mmol/L表面活性剂以及适 量防腐剂，其余为纯化水；

b、试剂R2：一种结合有抗人α1-微球蛋白抗体的纳米微球溶液，包括 5-200mmol/L的缓冲液、重量比例0.1％-5％的抗人α₁-MG抗体多克隆抗体和纳 米微球、并加入适量防腐剂，纳米微球直径为50-150nm；

c、参考校准品：一种用来与样本比较，进行结果计算的α1-微球蛋白溶液， 包括：100-200mmol/L pH7.0的缓冲液、171-180mmol/L的稳定剂、适量防腐 剂以及根据浓度需要确定量的重组α1-微球蛋白纯品，其余为纯化水。

α₁-微球蛋白参考校准品的浓度可以是高浓度单点参考校准品，在使用时 用生理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品；也可以直接制备成多个不同浓 度的参考校准品；这里没有特别的限制，只要制得的α₁-MG参考校准品能与样 本比较，能够测定样本中α₁-MG的含量即可。

所述α₁-微球蛋白试剂溶液中还加入反应促进剂PEG-6000，浓度为 3-10mmol/L。

所述结合有抗人α1-微球蛋白抗体的纳米微球溶液的制备方法是：用缓冲 液在室温下稀释重量比例为1∶1的抗人α₁-MG抗体多克隆抗体和纳米微球， 将两者混匀后室温振荡吸附2小时，加入含0.1％BSA的缓冲液封闭1小时，离 心去上清，再用缓冲液稀释至浓度为0.3％，并加入适当防腐剂。

抗人α₁-MG抗体多克隆抗体和纳米微球包括羊抗人α₁-MG抗体多克隆抗体 或兔抗人α₁-MG抗体多克隆抗体或鼠抗人α₁-MG抗体多克隆抗体。

所述稳定剂是乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白以及氯化钠中的一种或多 种的混合。

所述缓冲液是三羟甲基氨基甲烷或CAPSO。

所述防腐剂是广谱杀菌剂。

本发明检测试剂盒及标准所需主要原料是：