[发明专利]一种纳米微球免疫比浊法检测β2-微球蛋白试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于测定血清成份的试剂盒，特别是测定血清中的β2-微球 蛋白(β2-MG)的试剂盒，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。

背景技术

β₂-微球蛋白(β₂-MG)是一种低分子量(11800)的蛋白质，最先在肾小管性肾 炎的病人尿中分离；β₂-MG存在于几乎所有有核细胞表面，是人类白细胞抗原 (HLA)分子轻链的组成部分。作为HLA代谢和分解的产物，β₂-MG以低浓度的游 离形式出现在血清、尿液和其他体液中。游离β₂-MG通过肾小球滤过肾小管重 吸收排出和降解。因为β₂-MG每天在体内生成率较为恒定，且只被肾脏排泄， 测定血β2-MG可作为肾小球滤过率的指标。

已知测定β₂-微球蛋白(β₂-MG)的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射 免疫分析法、酶联免疫法(ELISA法)。这些方法存在着操作繁琐，需要特殊的 设备，样本需要预处理，不能进行批量样本分析和不能直接上全自动生化分析 仪检测等缺点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述背景技术的不足，提供一种β2-微 球蛋白检测试剂的改进，所提供的试剂应具有样本无需稀释、操作简单、准确 度高、重复性好，适用于各种类型的全自动生化分析仪的纳米微球免疫比浊法 检测β2-微球蛋白试剂盒。

本发明提供的技术方案是：

一种纳米微球免疫比浊法检测β₂-微球蛋白试剂盒，包括试剂R₁、试剂R₂以及参考校准品；其中：

a、试剂R₁：一种使样本中β₂-微球蛋白抗原位点充分暴露，有利于与抗β ₂-微球蛋白抗体试剂充分结合的β₂-微球蛋白溶液，包括5-200mmol/L缓冲液、 0.1-5mmol/L防腐剂、0.5-5mmol/L的稳定剂、50-200mmol/L电解质、0.1-4mmol/L 表面活性剂，其余为纯化水；

b、试剂R₂：一种结合有抗人β2-微球蛋白抗体的纳米微球溶液，包括 5-200mmol/L缓冲液、0.1％-5％重量比的结合有抗人β2-微球蛋白抗体的纳米微 球、适量的防腐剂，纳米微球直径为50-150nm；

c、参考校准品：一种用来与样本比较，进行结果计算的β2-微球蛋白溶液， 包括缓冲液100-200mmol/L，稳定剂166-180mmol/，适量防腐剂以及根据浓度 需要确定的一定量的重组人β2-微球蛋白纯品，其余为纯化水。将重组人β2- 微球蛋白纯品加入上述溶液中，获得所需浓度的β₂-MG参考校准品(该β2-微球 蛋白参考校准品为添加重组人β2-微球蛋白纯品的人血清或其它类似血清基质 的液体)。

β₂-MG参考校准品的浓度可以是高浓度单点参考校准品，在使用时用生理 盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品；也可以直接制备成多个不同浓度的参 考校准品。这里没有特别的限制，只要制得的β₂-MG参考校准品能够与样本比 较，能够测定样本中β₂-MG的含量即可。

所述β₂-微球蛋白试剂R1中还加入反应加速剂，浓度为3-10mmol/L。

所述稳定剂是乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白以及氯化钠中的一种或多 种的混合。

所述缓冲液是三羟甲基氨基甲烷或CAPSO。

所述防腐剂是广谱杀菌剂。

所述结合有抗人β2-微球蛋白抗体的纳米微球溶液的制备方法是：用缓冲液 在室温下稀释重量比例为1∶1的抗人β₂-MG抗体多克隆抗体和纳米微球，将两 者混匀后室温振荡吸附2小时(即常规的物理吸附法)，加入含0.1％BSA的缓冲 液封闭1小时，离心去上清，再用缓冲液稀释至浓度为0.3％，并加入适量防腐 剂。

抗人β₂-MG抗体多克隆抗体包括羊抗抗人β₂-MG抗体多克隆抗体或兔抗抗 人β₂-MG抗体多克隆抗体或鼠抗抗人β₂-MG抗体多克隆抗体。