[发明专利]一种血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒基因及其感染性克隆的构建无效
| 申请号： | 201010140195.1 | 申请日： | 2010-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN101857873A | 公开（公告）日： | 2010-10-13 |
| 发明（设计）人： | 廖明;张贺楠;赖汉漳;曹伟胜;罗开健;徐成刚;辛朝安 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/48 | 分类号： | C12N15/48;C12N15/63;C12N7/00 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血管瘤 变型 亚群禽 白血病病毒 基因 及其 感染性 克隆 构建 | ||
1.一种血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒感染性克隆，其特征在于该感染性克隆含有权利要求1所述血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒基因。
3.权利要求2所述血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒感染性克隆的构建方法，其特征在于该方法是采用特异性引物对SEQ ID NO：1所示血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒基因进行扩增，并采用pBlueskript SK(-)为载体，鸡胚成纤维细胞为宿主细胞，构建得到所需感染性克隆，所述特异性引物其核苷酸序列如SEQ ID NO：2～7所示。
4.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于所述构建方法具体包括如下步骤：
(1)采用核苷酸序列如SEQ ID NO：2～7所示特异性引物将J亚群禽白血病病毒SCAU-HN06株的前病毒全长基因组分成三段进行扩增，并且分别克隆于T载体中，构建质粒命名为pHN-A-T、pHN-B-T和pHN-C-T；
(2)采用EcoRI、KpnI、SalI和NotI这四个酶切位点，将pHN-A-T、pHN-B-T和pHN-C-T经双酶切、连接和转化后获得含有SEQ ID NO：1所示J亚群禽白血病病毒基因的重组质粒；
(3)将步骤(2)所得重组质粒和pBlueskript SK(-)载体分别进行SalI和NotI双酶切，连接转化后获得重组质粒pSK-ALV-HN；
(4)将重组质粒pSK-ALV-HN导入鸡胚成纤维细胞中制备得到所需感染性克隆。
5.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于所述步骤(2)中，先将质粒命名为pHN-A-T和pHN-B-T分别进行EcoRI和SalI双酶切、连接和转化后得到质粒pHN-(A+B)-T，然后将质粒pHN-(A+B)-T和pHN-C-T分别进行KpnI和NotI双酶切、连接和转化后得到含有SEQID NO：1所示J亚群禽白血病病毒基因的重组质粒。
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