[发明专利]一种用于结核病预防的重组卡介苗有效
| 申请号： | 201010140373.0 | 申请日： | 2010-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN101822829A | 公开（公告）日： | 2010-09-08 |
| 发明（设计）人： | 鲍朗;杨晓玲;邓仪昊 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | A61K39/04 | 分类号： | A61K39/04;C12N15/62;C12N15/74;C12N1/21;A61P31/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610041 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 结核病 预防 重组 卡介苗 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组卡介苗rBCG：GMCSF-CFP10-ESAT6，其特征在于，将GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合 基因重组入卡介苗。
2.如权利要求1所述的重组卡介苗的制备方法，其特征在于，该方法包括以下几个步骤：
(1)hGM-CSF基因的扩增、结核分枝杆菌CFP10基因和ESAT6基因的扩增；
(2)CFP10-ESAT6融合基因的扩增；
(3)GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合基因的扩增；
(4)将GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合基因插入至大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭质粒pMV361中，构 建rpMV361GMCSF-CFP10-ESAT6；
(5)将(4)中的重组质粒电转化入卡介苗；
(6)用卡那霉素进行筛选；
(7)提取基因组，扩增GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合基因；
(8)热诱导后收集细菌蛋白，Western-blot鉴定GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合蛋白的表达。
3.一种重组质粒的制备方法，其特征在于，将人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)序列和结 核分枝杆菌CFP10基因和ESAT6基因序列共同插入大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭质粒序列中。
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