[发明专利]一种分泌表达黑曲霉木聚糖酶的食品级重组乳酸乳球菌及制法

权利要求书

1.一种可表达分泌型黑曲霉木聚糖酶B的食品级重组乳酸乳球菌，其特征在于：菌株中含有表达载体pNZS-XYNB，所述的表达载体pNZS-XYNB是在载体pNZ8149中加入了以下元件：乳酸乳球菌MG1363的Usp45信号肽基因SPusp45序列；黑曲霉木聚糖酶B的成熟肽编码序列XYNB。

2.权利要求1所述食品级重组乳酸乳球菌的构建方法，包括以下步骤：

1)将乳酸乳球菌MG1363的Usp45信号肽基因SPusp45序列克隆到表达载体pNZ8149的启动子PnisA下游；

2)利用特异性引物通过PCR方法删除启动子序列和信号肽基因序列间的NcoI酶切位点，将SPusp45融合到PnisA下游，构建的载体pNZS；

3)将黑曲霉木聚糖酶B基因(XYNB)克隆到分泌表达载体pNZS的多克隆位点中，构建了可表达分泌型黑曲霉木聚糖酶B的载体pNZS-XYNB，将pNZS-XYNB载体利用电击转化的方法转入受体菌L.lactis N3900，通过筛选培养获得分泌表达黑曲霉木聚糖酶B的食品级重组乳酸乳球菌。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：SPusp45序列的引物为：

5′端引物P1：

5′GGGCCATGG ATGAAAAAAAAGATTATCTCAGCTATTTTAATGTCTACAGTGATACTTTC 3′

3′端引物P2：

5′TAT GCATGC AGCGTAAACACCTGACAACGGGGCTGCAGCAGAAAGTATCACTGTAGACA 3′

改造载体删除NcoI酶切位点用引物为：

5′端引物P2：

5′ATGAAAAAAAAGATTATCTCAGC 3′

3′端引物P3：

5′GGTGAGTGCCTCCTTATAAT 3′。