[发明专利]一种在革兰氏阳性菌中合成的CDP-2-甘油及其制备方法

权利要求书

1.一种在肺炎链球菌23F中采用还原酶合成CDP-2-甘油的方法，其特征在于它的制 备方法如下：

10mM的1，3-二羟基丙酮，1mM的NADH，pH7.4的50mM磷酸盐缓冲液，2.97μM 还原酶Gtp1的纯化酶制剂，37℃恒温水浴锅中反应0.5小时，1，3-二羟基丙酮即被还原 成甘油，然后5mM甘油，5mM ATP，5mM CTP，pH7.4的50MM磷酸盐缓冲液，0.05U/ml IP， 0.071mM重组磷酸化酶Gtp3的纯化酶制剂和0.026mM的重组CDP转移酶Gtp2的纯化酶 制剂，37℃水浴反应0.5小时，加入等体积的氯仿抽提，水相经Beckman Coulter P/ACE  MDQ毛细管电泳分析，有CDP-2-甘油的生成；

其中所述的还原酶Gtp1编码的基因选自SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，具有SEQ ID  NO：4所示的氨基酸序列；

所述的编码CDP转移酶Gtp2的基因选自SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，具有SEQID  NO：6所示的氨基酸序列。

所述的编码磷酸化酶Gtp3的基因选自SEQID NO：2所示的核苷酸序列，具有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。

2.权利要求1所述的方法，其中还原酶Gtp1的重组质粒载体为pET-28a(+)，重组 菌是导入了还原酶。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于在磷酸化酶Gtp3作用下，将甘油转化为甘 油2-磷酸。

4.权利要求1所述的方法，其中磷酸化酶Gtp3的重组质粒载体为pET-28a(+)，重 组菌是通过导入到磷酸化酶Gtp3。

5.权利要求1所述的方法，其特征在于在CDP转移酶Gtp2的作用下，将甘油2-磷 酸转化为CDP-2-甘油。

6.权利要求1所述的方法，其中CDP转移酶Gtp2的重组质粒载体为pET-28a(+)， 重组菌是导入到CDP转移酶Gtp2中。