[发明专利]多花筋骨草再生体系建立及快速繁殖方法

说明书

技术领域：

本发明属于植物离体繁殖成苗技术领域，特别涉及一种组培成苗快繁方法。

背景技术：

多花筋骨草(Ajuga multiflora Bunge)为唇形科(Lamiaceae)筋骨草属(Ajuga)常绿多年生草本。茎四棱，具匍匐茎和直立茎。茎节有气生根，叶对生，边缘具粗锯齿，先端钝圆，基部楔形，叶片纸质，长椭圆形，叶片有皱折，生长季节绿中带紫，入秋后叶片紫红色，花蓝紫色，轮伞花序，长年零星开放，比较集中开放时间为4-5月和10-12月，株高25-30cm。其花期长，株型美观，生长快，易栽培，极具观赏价值，可成片栽于林下、湿地，达到黄土不见天的效果，已成为绿化的主要地被植物品种。

该植物具有清热解毒、止咳化痰、凉血消肿、解毒的功效，可用于治疗腹泻、肝炎、外伤出血等，对多种细菌具有抑制功能。研究发现服用筋骨草后，临床检测到的白细胞增加，血清谷丙转氨酶活力显著下降，表明其对肿瘤及病毒性疾病确有疗效。多花筋骨草成分复杂，全草含有黄酮类、生物碱、有机酸、酚性物质等。其中蜕皮甾酮具有促进核酸和蛋白质合成、影响糖类和脂类代谢、改善肝功和促进创伤愈合等作用。而目前国内外对筋骨草成分的提取和分离主要以天然资源为主，由于资源有限，不少植物处于濒危状态，数量急剧减少，无法满足实际生产需要和大规模生产要求。因此，如何不受地理气候条件限制，节省土地、降低成本、缩短生长周期，以保证和提高蜕皮激素类似物的含量已经成为迫在眉睫。本发明以多花筋骨草叶片为外植体诱导获得大量多花筋骨草离体再生苗，建立了多花筋骨草离体快速繁体系，在解决以上问题的基础上，为多花筋骨草的大规模生产奠定了基础。

发明内容：

本发明的目的是提供一种多花筋骨草再生体系及快速繁殖方法的组织培养发法；为以植物蜕皮激素类似物为目标产物的细胞或组织培养技术奠定良好的基础。该方法培养的芽健康，茁壮，增殖时间短，成苗移植后成活率高。

技术方案：

(1)取材方法：选取多花筋骨草的叶片作为外植体进行接种。

(2)培养基的配制：在基本培养基MS中分别添加激素：BA，2，4-D，NAA或IBA中的几种，分别配制成芽诱导培养基，丛生芽诱导培养基，愈伤诱导培养基和生根培养基，所述这些培养基PH值为5.8，培养基厚度为1.1～1.5cm。

(3)芽诱导培养：选择叶片，将叶片切成1cm×1cm大小，接种在所述的芽诱导培养基上。培养条件为：培养温度：25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，诱导培养的时间为30～35d。

(4)愈伤诱导培养：选择叶片，将叶片切成1cm×1cm大小，接种在所述的愈伤培养基上。培养条件为：培养温度：25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，诱导培养的时间为30～35d。

(5)增殖培养：将经过步骤(3)和(4)诱导培养的诱导芽和愈伤组织切成0.5cm长的小块，接种在所述的增殖培养基上培养，培养条件为：培养温度：25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，丛生芽诱导培养的时间为25～30d。

(6)诱导生根培养：将经过步骤(5)诱导长大的丛生芽分成单株，转移到所

述的生根培养基中培养。培养条件为：培养温度：25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，生根培养的时间为25～30d。

(7)小苗移栽：当试管苗长至有4～6条根，7～9片叶子，叶长1.5～2cm时，完成多花筋骨草再生体系的建立及快速繁殖方法。

本发明的显著优点是：叶片经过诱导培养，30～35d即可萌发生长出健壮的新芽；再经过25～30d的增殖培养，25～30d的生根培养后即可成苗，移栽，成活率达95％以上；苗生长健壮，长势良好。

附图说明：

图1愈伤诱导出芽

图2增值培养出的丛生芽

图3生根培养诱导的苗和根

图4移栽后的苗

具体实施方式：

为了更好的理解本发明，下面结合本发明的实施例进一步说明本发明的实质性内容：

实例1：选取多花筋骨草的叶片作为外植体进行接种。

培养基的配制：

在基本培养基MS中分别添加激素：BA、2，4-D、NAA或IBA中的几种，分别配制成芽诱导培养基，丛生芽诱导培养基，愈伤诱导培养基和生根培养基，所述这些培养基PH值为5.8，培养基厚度为1.1～1.5cm。

芽诱导培养基：MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L