[发明专利]一种鹿角盘胶原蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于胶原蛋白提取纯化技术领域，具体涉及一种先是采用水提法提取鹿角盘胶原蛋白，再用胰蛋白酶酶解，从而得到水溶性很好的胶原蛋白的方法。

背景技术

鹿角盘别名“鹿花盘”、“鹿角脱盘”、“珍珠盘”，是雄性梅花鹿(CervusnipponTemminok)或马鹿(Cervuse laphusk)经锯茸后，于次年脱落的骨化残角，是界于鹿茸骨化和未骨化之间十分坚硬的盘状物质(高士贤.中国动物药志[M].长春：吉林科学技术出版社，1996：69326941)。民间常用于治疗乳腺炎、恶疮、痈肿等。

胶原具有完整的三螺旋结构，分子量大约为30万，不溶于冷水和热水，不能被蛋白酶利用；明胶是胶原在酸、碱、酶或高温作用下的变性产物，它不是均一的蛋白质，而是一种热可溶性的混合物，温度降到30℃以下形成凝胶，加热则液化；胶原蛋白是胶原或明胶的水解产物，具有较小的分子质量，可溶于冷水，并且更易降解，易被人体消化吸收。(蒋挺大，胶原与胶原蛋白[M]，北京，化学工业出版社，2006，2)。

胶原蛋白与机体的生长、衰老和疾病有着极其密切的联系。胶原蛋白不仅具有美容、预防骨质疏松、改善关节健康、改善血液循环、健胃、提高人体免疫力等功效，而且具有良好的生物相容性、营养性、修复性、保湿性、配伍性和亲和性，所以被广泛应用于生物医学材料、化妆品、食品及保健品等功能性产品。在绝大多数的蛋白质中脯氨酸含量很少，而胶原蛋白中脯氨酸和羟脯氨酸的含量是各种蛋白质中最高的，这两种氨基酸为环状氨基酸，能锁住整个胶原分子，使之很难拉开，故胶原具有微弹性和很强的拉伸强度。

胶原蛋白是鹿角盘的主要功效成分之一。鹿角胶能温补肝肾、益精养血，用于阳痿滑精、腰膝酸冷、虚劳赢瘦、崩漏下血、便血尿血、阴疽肿痛；鹿角霜具有温肾助阳、收敛止血之功效，用于脾肾阳虚、食少吐泻、白带、遗尿、尿频、崩漏下血、痈疽痰咳(张宝香，金春爱，赵延平.鹿角盘的化学成分与开发利用[J].特种经济动植物，2005，(12)：7.)。吴静等人通过对大白鼠胃黏膜损伤的实验观察发现，鹿角胶溶液还能够降低胃黏膜损伤指数，增强胃黏膜屏障，具有显著的保护作用(吴静，余仕龙，王峰，等.鹿角胶对大鼠胃黏膜保护作用的实验研究[J].实用医学杂志，2007，23(17)：2636)。实验证明，鹿角胶还能明显增加小白鼠血红蛋白含量及胸腺重量，具有显著的抗疲劳作用和增加免疫力的作用。因此可以考虑开发鹿角胶来研制成适合于中老年人的补虚劳、提高机体抗病能力的保健食品(包海鹰，张颖悟，邓明鲁.国产鹿角的研究状况及开发前景[J].吉林农业大学学报，1995，17(4)：96)。

采用现代酶解技术，生产具有活性的小分子鹿角盘胶原蛋白，是一个低风险、高产出的高科技项目，具有很高的经济效益和社会效益，可改善鹿角盘产品科技含量低、产品剂型单一的局面，增加产品附加值和市场竞争力，为鹿角盘产品的开发开辟了新的道路。

发明内容

本发明的目的是提供一种鹿角盘胶原蛋白的制备方法，其是先用水提法提取鹿角盘胶原，再用胰蛋白酶酶解按最佳工艺提取的胶原，用高效凝胶色谱法确定酶解条件，浓缩，离心，将上清液冻干得到鹿角盘胶原蛋白。

本发明所述的鹿角盘胶原蛋白的制备方法，包括如下步骤：

1)取鹿角盘，刷净表面，置流水中浸泡至水清，取出沥干，磨成细粉，过200目筛，备用；

2)取上述处理好的鹿角盘，按料液比1∶5～1∶15(g/ml)加蒸馏水，然后置于加热板上边搅拌边加热煮沸，沸腾后继续加热2～4小时，然后将煮好的鹿角盘放至室温，离心(4500～5000rpm/min、25～45min)，所得沉淀采用上述方法共提取2～4次，弃掉沉淀，合并多次提取的上清液定容至200ml容量瓶中，即为明胶溶液，取1ml用Folin-酚试剂法测定蛋白含量，胶原蛋白含量为60.30～66.50％(质量百分比)。

3)取步骤2)的明胶溶液200ul，0.2um～0.45um滤膜过滤，取20ul滤液进样，记录高效液相凝胶过滤色谱图，明胶溶液保留时间为10～12min；

4)向步骤2)的明胶溶液中按8000g～15000g鹿角盘加1g胰蛋白酶的比例，加入胰蛋白酶，然后置于37℃恒温水浴锅中，酶解15～90min后立即升温至80～100℃，保温10～15min，使胰蛋白酶失活；取出放置至室温，离心(4500～5000rpm、25～45min)，弃掉沉淀，上清液即为胶原蛋白溶液。