[发明专利]鉴定转植酸酶基因玉米BVLA430101的转化体特异性PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明属于转基因植物检测领域，特别是涉及一种鉴定转植酸酶基因玉米BVLA430101 的转化体特异性PCR检测方法。

背景技术

自从1996年转基因作物大规模商业化种植以来，全球转基因作物的种植面积迅猛增加。 2009年全球种植转基因作物种植的国家达到25个，种植面积总计达1.34亿公顷，是1996年 种植面积的79倍。其中转基因玉米全球种植面积达4100万公顷，占玉米种植面积的26％ (James，Clive.2009.Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops：2009.ISAAA Brief No.41.ISAAA：Ithaca，NY.)。

我国于2009年8月批准了转植酸酶基因玉米BVLA430101的生物安全证书 (http://www.stee.agri.gov.cn/biosafety/spxx/P020091127591594596689.pdf，审批编号：农基安 证字(2009)第074号)，同时我国还批准国外9个转基因玉米品种进口用作加工原料 (http://www.stee.agri.gov.cn/biosafety/spxx/t20091022_819214.htm)。目前我国已经研究和制 定了多个国外转基因玉米的检测方法，并颁布为国家标准(如农业部869号公告-3-2007转 基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种定性PCR方法)，但转 植酸酶基因玉米BVLA430101的特异性检测方法尚未见报道。

PCR技术是转基因作物检测中应用最为广泛的技术。在应用这种技术进行转基因作物定 性检测时，根据其扩增的靶标区域和特异性将其分为四类：一、筛选检测，以转基因通用的 外源启动子和终止子为靶标区域；二、基因特异性检测，以特异的外源目的基因为靶标区域； 三、构建特异性检测，以转基因元件之间的特异构建为靶标区域；四、转化体特异性检测， 以转化体特异性片段为靶标区域。这四类检测方法对转基因作物的品系检测特异性是逐渐增 加的。这四类检测方法对转基因作物的检测特异性是逐渐增加的，转化体特异性检测是目前 对转基因品系检测特异性最高的检测方法，也是目前转基因检测中最常用的身份检测方法， 这种检测方法能够区分同一转化载体产生的不同转化植株品系。

发明内容

针对上述领域中的空白，提供了转植酸酶基因玉米BVLA430101的转化体特异性序列以 及鉴定转植酸酶基因玉米BVLA430101的转化体特异性PCR方法，该PCR方法能利用普通的 PCR仪器、试剂快速准确鉴别出转植酸酶基因玉米BVLA430101，以及以转植酸酶基因玉米 BVLA430101为亲本的玉米品系。

转植酸酶基因玉米BVLA430101转化体特异性序列，如Seq ID No.1所示，其中转化载体 序列位于1-509bp，玉米基因组序列位于510-1345bp。

鉴定转植酸酶基因玉米BVLA430101的转化体特异性PCR检测方法，其特征在于：PCR 反应中的正向引物依据SEQ ID NO1中1-509位序列设计，反向引物依据SEQ ID NO1的 510-1345位序列设计。

所述正向引物为101-F：5‘-TTAAGTTGGGTAACGCCAGG-3’，

所述反向引物为101-R：5‘-AGCTCGAACTCACAAATGAG-3’。，扩增的片段为长度为 228bp

本发明提供的转植酸酶基因玉米BVLA430101的转化体特异性序列以及依赖其建立的转 化体特异性PCR方法可作为一种鉴定转植酸酶基因玉米BVLA430101，以及以这个品种为亲本 的转基因玉米品系的有效手段，由于转植酸酶基因玉米BVLA430101是我国目前批准的第一 个允许商业化种植的转基因玉米品系，因此本发明为特异性鉴定转植酸酶基因玉米 BVLA430101提供了便利，该方法的优点在于快速、灵敏度高、特异性好、所需实验条件不 高，因此有非常高的实用价值。

附图说明

图1转植酸酶基因玉米BVLA430101转化体特异性序列的Genome Walking扩增

A：第一次Walking结果；B：第二次Walking结果

M：DNA Marker DL2000；1-4：DL1-DL4的Walking产物