[发明专利]用于猪精液冷冻保存的抗冻剂及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于猪精液保存的抗冻剂及其制备和应用。

背景技术

自Polge等1956年开始猪精液冷冻保存试验研究以来，许多国家相继开展了此项技术的研究，目标是提高它的繁殖成绩，达到现场生产可接受的水平。养猪业是畜牧业的重要组成部分，猪的常温液态保存精液技术已经被大面积地推广和应用到养猪生产实践中。精液冷冻保存是人工授精的一项重大变革，不但解决了精液长期保存的问题，有利于本地猪种资源保护，还使精液不受时间、地域的限制，便于开展省际、国际之间的协作，提高优良种猪的利用率；而且极大地延长了种猪基因物质的使用寿命，使优良种猪在短期进行后裔测定，保留和恢复精液供应、血统更新、引种、降低生产成本等方面均有重要意义。随着全国性、区域性种猪联合育种工作的深入开展，猪的冷冻精液技术研究越来越显得迫切。但目前在国内外养猪生产中，存在的主要问题之一是猪冷冻精液生产技术水平较低，受胎率普遍不高，严重制约着猪品种改良和肉品质量的提高。

精液冷冻的目的正是为了提供人工授精所需精子产品的一种精子库。冷冻以后精子的受精能力是保障哺乳动物高妊娠率的重要因素，与冷冻-解冻后精子质量密切相关。由于猪精子对冷休克特别敏感，解冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整率以及发育能力远远不及鲜精，利用冷冻精液人工授精后母猪较低的受胎率及较少的窝产仔数等导致猪冷冻精液不能广泛应用于商品化养猪生产。为了解决这一问题，科研工作者进行了大量的试验和研究，但是冷冻-解冻后精子活率仍不十分理想。

发明内容

本发明要解决的技术问题是猪精液冷冻-解冻后精子活率低。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种用于猪精液冷冻保存的抗冻剂，其含有鸽子蛋卵黄，具体包括如下体积份数的组分：

冷冻基础液        82～90，

鸽子蛋卵黄        10～18。

作为优选，上述抗冻剂包括如下体积份数的组分：

冷冻基础液        85～87，

鸽子蛋卵黄        13～15。

所述冷冻基础液为本领域技术人员所用的常规的冷冻基础液。

作为优选，所述冷冻基础液由葡萄糖1.1g，柠檬酸1.48g，Tris 2.42g，青霉素钠0.06g，硫酸链霉素0.1g溶于100ml蒸馏水配制而成。

本发明还提供一种上述的用于猪精液冷冻保存的抗冻剂的制备方法，包括下列步骤：

1)取葡萄糖1.1g，柠檬酸1.48g，Tris 2.42g，青霉素钠0.06g，硫酸链霉素0.1g溶于100ml蒸馏水，配制成冷冻基础液；

2)取冷冻基础液与鸽子蛋卵黄混匀配制成I液；

3)在步骤2所配制的I液中添加体积百分比为2～10％甘油配制成II液；

4)调节所述II液pH值至6.0～7.5，过滤灭菌，冷却至室温，放入4℃冰箱中保存。

本发明提供一种使用上述抗冻剂冷冻保存猪精液的方法，步骤如下：

1)将新鲜精液离心，弃上清，加入等量预温的冷冻稀释液(Betsville ThawingSolution，BTS)，经纱布包裹后，在17℃恒温箱中平衡1-3h；

2)将步骤1)平衡处理后的精液在17℃离心，弃上清，加入等温等体积I液，用纱布包裹后置于4℃冰箱中平衡1-3h；

3)向步骤2)平衡处理后的精液中加入2倍体积等温II液，调整精子密度为1.0×10⁹个/ml，4℃冰箱平衡1-2h；

4)将精液吸入0.25ml细管内，快速封管，置于程序冷冻仪中以1℃/min的速率从4℃缓慢降至-5℃，迅速移至液氮上方2-3cm熏蒸5-10min，将细管投入液氮中保存。

本发明首次将鸽子蛋卵黄作为冷冻抗冻剂用于猪精液冷冻保存，制备方法简单，取材容易，效果可靠，易于推广，适用于猪细管冷冻精液人工受精及猪精液超低温冷冻后的长期保存和长途运输后输精，可显著提高猪精液冷冻-解冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整率，保持其授精活力。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1

鸽子蛋卵黄的制备