[发明专利]一种制备13C标记葡萄糖的方法

权利要求书

1.一种制备¹³C标记葡萄糖的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)以毕赤酵母作为出发菌株，¹³C甲醇作为碳源，经发酵、离心获得菌体，经乙醇溶液提取、脱色、结晶，获得¹³C标记的海藻糖；

(2)将¹³C标记的海藻糖酸解，然后，中和、脱色、结晶，获得¹³C标记的葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的一种制备¹³C标记葡萄糖的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

(1)将毕赤酵母一环接入种子培养基中，115℃灭菌20min，再于28-37℃，控制转速为150-240rpm摇瓶培养16-24h，得到种子液，以10％V/V的接种量将种子液接入发酵培养基中，灭菌后用30％的浓氨水调节发酵培养基的pH至4.0-6.0，加入灭菌的甲醇和微量元素，控制温度为28-37℃，转速为150-240rpm摇瓶发酵24-48h，升温至40-50℃，维持0.5-4h得到菌体，再控制温度为-5～5℃，转速为4000rpm离心20min，将菌体用蒸馏水洗涤，继续离心20min，控制温度30-90℃，采用30-70wt％乙醇提取菌体0.5-5h，得到的提取液经10000分子量的纳滤膜过滤、市售D001树脂脱色及无水乙醇结晶步骤，即得到¹³C海藻糖；

(2)将¹³C海藻糖放入硫酸中于95-105℃酸解5-8h，加入碳酸钡中和到pH为6.8-7.0后，离心，上清液经市售D001树脂脱色，最后经过浓缩、结晶，得到¹³C标记的葡萄糖。

3.根据权利要求2所述的一种制备¹³C标记葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的种子培养基以蒸馏水为溶液，包括以下组分及含量：¹³C甲醇，5-30mg/L，无氨基酸的酵母氮碱1-13.4g/L，生物素5-20mg/L，磷酸氢二钾0.10-3.24g/L。

4.根据权利要求2所述的一种制备¹³C标记葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的发酵培养基包括以下组分及含量：CaSO₄·2H₂O 0.05-0.93g/L，MgSO₄·7H₂O 1.5-14.9g/L，磷酸氢二钾1-53.4g/L。

5.根据权利要求2所述的一种制备¹³C标记葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的微量元素包括以下组分及含量：FeSO₄·7H₂O 65g/L，MnSO₄·H₂O 3g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2g/L，H₃BO₃ 0.2g/L，CoCl₂0.5g/L，ZnCl₂20g/L，生物素0.2g/L，CuSO₄·5H₂O 6g/L，KI 0.8g/L，肌醇0.3g/L，烟酰胺0.8g/L，对氨基苯甲酸0.06g/L，维生素B₁0.8mg/L，维生素B₂0.02mg/L。

6.根据权利要求2所述的一种制备¹³C标记葡萄糖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中发酵培养基、甲醇和微量元素的重量比为1000∶(5-30)∶(1-10)。