[发明专利]1-磷酸-鞘氨醇(S1P)受体激动剂用于制备治疗脑变性性疾病的药物的应用

说明书

本申请为2004年12月17日提交的申请号为PCT/EP2004/014436、发明 名称为“1-磷酸-鞘氨醇(S1P)受体激动剂用于治疗脑变性性疾病的应用”的 国际申请的分案申请，该申请于2006年6月19日进入中国国家阶段，申请号 为200480037861.1。

技术领域

本发明涉及1-磷酸-鞘氨醇(S1P)受体激动剂的新应用，特别是在治疗进 行性痴呆或脑变性性疾病中的应用。

背景技术

S1P受体激动剂是作为激动剂向一种或多种1-磷酸-鞘氨醇受体例如 S1P1至S1P8发信号的化合物。激动剂与S1P受体结合可使得例如细胞内的 异源三聚体G-蛋白离解成Gα-GTP和Gβγ-GTP和/或增加激动剂占据的受 体的磷酸化作用和下游信号途径/激酶的活化，或由于超激动作用而导致受 体的内在化/脱敏并由此通过天然配体S1P而产生受体信号的拮抗作用。

可以用下面的试验来测定S1P受体激动剂对人类个体S1P受体的结合 亲合力：

用人S1P受体S1P₁、S1P₃、S1P₂、S1P₄和S1P₅对化合物的S1P受体激动 剂活性进行试验。通过对化合物诱导的与由稳定表达适宜人S1P受体的转 染CHO或RH7777细胞制得的膜蛋白结合的GTP[γ-³⁵S]进行定量来对功能 受体活化进行评估。所用的分析技术是SPA(闪烁亲近测定法)。简单地说， 将用DMSO溶解的化合物连续稀释并在存在50mM Hepes、100mM NaCl、 10mM MgCl₂、10μM GDP、0.1％无脂肪的BSA和0.2nM GTP[γ-³⁵S] (1200Ci/mmol)的情况下将其加入到SPA-小珠(Amersham-Pharmacia)固 定的表达S1P受体的膜蛋白(10-20μg/孔)中。在将其在96孔微量滴定板中在 室温下培养120分钟后，通过离心将未结合的GTP[γ-³⁵S]分离出来。用 TOPcount板式读数器(Packard)对通过膜结合的GTP[γ-³⁵S]触发的SPA小 珠的发光进行定量。用标准曲线拟合软件计算EC₅₀。在这种试验中，S1P 受体激动剂对S1P受体的结合亲合力优选地＜50nM。

用例如用myc-标记的人S1P受体转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞来测 定S1P受体的内在化和脱敏。通过使用荧光标记的抗-myc抗体的FACS分析 来测定由于激动剂的刺激所产生的受体内在化。

优选的S1P受体激动剂是那些例如除其S1P结合性外还具有加速淋巴 细胞复位特性的化合物，例如可引起由于淋巴细胞从循环系统向次级淋巴 组织的再分布(优选可逆性再分布)而导致的淋巴细胞减少并同时不会引起 全面免疫抑制的化合物。分离细胞；来自血液的CD4和CD8T-细胞以 及B-细胞被刺激迁移到淋巴结(LN)和派伊尔氏淋巴集结(PP)中。

在下面的血液淋巴细胞消耗试验中对淋巴细胞复位特性进行测量：

通过管饲法将S1P受体激动剂或载体口服给药于大鼠。在第-1天获取用 于进行血液学监测的尾部血以获得个体的基准值，并且在应用后第2、6、 24、48和72小时取尾部血来进行血液学监测。在该试验中，S1P受体激动 剂消耗了外周血的淋巴细胞，例如当以＜20mg/kg的剂量被给药时消耗了 50％。优选的S1P受体激动剂还包括除其S1P结合性外还可内在化/脱敏S1P 受体，从而拮抗血管细胞例如内皮细胞上的溶血磷脂(包括例如1-磷酸-鞘氨 醇(S1P)、鞘磷酸胆碱(SPC)、溶血磷脂酸(LPA)等等)驱动的炎性过程的化 合物。使用用人myc-标记的S1P受体转染的CHO细胞来测定化合物的内在 化/脱敏容量。

发明内容

适宜的S1P受体激动剂的实例有例如：

-EP627406A1中所公开的化合物，例如式I的化合物

其中R₁是直链-或支链(C_12-22)碳链

-其可在所说的链中具有选自双键、三键、O、S、NR₆和羰基的键或杂原 子，其中R₆是H、烷基、芳烷基、酰基或烷氧基羰基，和/或