[发明专利]一种酶的单分子包埋方法

权利要求书

1.一种酶的单分子包埋方法，其特征在于：该方法首先将酶修饰剂N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺、丙烯酰氯或衣康酸酐与酶分子上的氨基反应，使单个酶分子接上双键，然后使双键与交联剂反应将单个酶分子包埋其中。

2.根据权利要求1所述的一种酶的单分子包埋方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：

①将酶粉溶解在缓冲溶液中配制成浓度为2g/L～20g/L的酶液备用，将酶修饰剂溶于有机溶剂中备用，浓度为100g/L～500g/L；

②将酶液与酶修饰剂置于20～40℃水浴中振荡反应1～5h，使单个酶分子接上双键，并用缓冲溶液透析12～48h除去未反应的小分子；

③将交联剂与上述步骤②得到的修饰后酶液混合，然后加入引发剂，20～60℃下反应3～8h，整个过程需N₂保护，然后研磨、清洗、过滤及冻干制成酶的单分子包埋颗粒；

④上述步骤②中的酶液体积为10ml，则加入的酶修饰剂体积为0.1ml～10ml，步骤③中加入的交联剂总质量为2g～6.2g，引发剂为质量浓度5％的过硫酸铵0.1ml～0.8ml和N，N，N′，N′-四甲基二乙胺0.01ml～0.05ml或质量浓度4％的过硫酸钾0.5ml～1ml和亚硫酸氢钠0.1g～0.3g。

3.根据权利要求2所述的一种酶的单分子包埋方法，其特征在于：所述的酶为辣根过氧化物酶、蛋白酶或葡糖氧化酶。

4.根据权利要求2所述的一种酶的单分子包埋方法，其特征在于：所述的缓冲溶液为磷酸盐缓冲液、硼酸缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液或磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。

5.根据权利要求2所述的一种酶的单分子包埋方法，其特征在于：所述的酶修饰剂为N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺、丙烯酰氯或衣康酸酐。

6.根据权利要求2所述的一种酶的单分子包埋方法，其特征在于：所述的有机溶剂为二甲基亚砜、氯仿、丙酮或二甲基甲酰胺。

7.根据权利要求2所述的一种酶的单分子包埋方法，其特征在于：所述的交联剂为二缩三乙二醇二甲基丙烯酸酯、三缩四乙二醇二甲基丙烯酸酯、聚乙二醇二丙烯酸酯、聚乙二醇二甲基丙烯酸酯和一些分子结构至少含有2个乙二醇片段及碳-碳双键的化合物，或上述交联剂中的任意一种与丙烯酰胺、N，N-双甲基亚丙烯酰胺、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯中的一种组成的复合交联剂。