[发明专利]猪链球菌2型亚单位疫苗及应用

说明书

技术领域

本发明是申请号为2008102253466申请案的分案申请。

本发明涉及家畜传染病疫苗制备技术领域。具体涉及一种猪链球菌2型亚单位疫苗及其制备方法及应 用。本发明涉及基于猪链球菌2型的三种抗原蛋白基因的克隆、表达及功能验证和应用。所述的基因表达 的抗原蛋白能够提高猪抵抗猪链球菌2型的能力。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis，S.suis)是引起猪链球菌病的主要病原，依据细菌表面的荚膜多 糖(CPS)可以将S.suis分为35个血清型，分别为1/2型和1～34型，但最近也有人提出32型和34型 应该归于streptococcus orisratti，而不应该归于猪链球菌，其中猪链球菌2型是毒力最强、其中猪链球 菌2型(SS2)致病性强、流行广，该型亦是临床分离频率最高的血清型。SS2是一种重要的人畜共患病 病原体，能引起猪脑膜炎(meningitis)、心内膜炎(endocarditi)、败血症(septicemia)、关节炎 (arthritis)、浆膜炎(polyserositis)、肺炎(pneumonia)等，常引起断奶仔猪或育肥猪突然死亡； 人类感染该菌，可导致脑膜炎，引发永久性耳聋、败血症、心内膜炎，甚至死亡。1991年首次报道在广 东省发现猪2型链球菌疑似病例，1998-1999年江苏省部分地区连续2年在盛夏季节暴发该病。目前 已有足够的流行病学资料证实，SS2已经对我国的养殖业和人民健康构成了严重的威胁。

由于缺乏猪链球菌病的流行病学资料，致病机理不清，无有效的疫苗和敏感的诊断方法，在很多国家 猪链球菌病一直未能得到有效地控制。

尽管对猪链球菌2型的致病机理目前仍处在研究和发现阶段，影响了猪链球菌2型疫苗研究的顺利进 行，但该疫苗的研究仍取得了一定的进展。目前研究的猪链球菌2型疫苗主要有灭活疫苗、活疫苗、基因 工程活载体疫苗和亚单位苗，但在实际应用中各有不足之处。灭活疫苗对同源的猪链球菌具有较好的免疫 保护，但由于不同菌株的毒力基因表性存在较大差异，对于异源菌株的保护力不佳；活疫苗可使猪得到保 护，但不能清除定居在扁桃体或关节里的2型猪链球菌，也不能清除隐性感染猪扁桃体内的细菌；活载体疫 苗主要是当今与未来疫苗研制与开发的主要方向之一，疫苗兼有常规活菌苗和灭活菌苗的优点，但是按照 美国食品与药物管理局(Food and drug administ ration，FDA)的规定，活疫苗中不能存在抗药质粒， 并且在人和动物体内，无法用抗生素来维持重组质粒的稳定性；亚单位苗具有活菌苗的免疫效力高、及灭 活菌苗的安全性好等优点，但是，亚单位苗的抗原成分单一，对其他血清型的保护作用有限。范红结等研制 的链球菌重组亚单位疫苗能对马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型提供较好的保护，但目前国内猪链球菌病 病原以猪链球菌2型为主，其它型猪链球菌也占了一定比例，而马链球菌兽疫亚种比例则越来越小。因此， 预防猪链球菌2型和其它型猪链球菌越来越重要。

鉴于此，本发明着手于猪链球菌2型新型免疫保护性抗原的研究，寻找几种免疫保护效果好，并且在 猪链球菌2型以外的其它猪链球菌血清型中广泛存在的免疫原性蛋白，进而组合成有效的猪链球菌亚单位 疫苗。

发明内容

本发明的目的是获得具有很好适用于猪链球菌2型的免疫原性蛋白，通过对编码该基因的序列的克 隆、表达，进一步验证其功能，并制备一种能抵抗猪链球菌2型的亚单位疫苗。

解决本发明的核心技术方案是：克隆报道的HP0197、HP1036和Enolase基因；通过大肠杆菌表达， 制备对猪链球菌2型有免疫原性的抗原蛋白，进而制备一种猪链球菌2型亚单位疫苗。另外，本发明还包 括所述重组大肠杆菌及其分泌的抗原蛋白在制备猪链球菌2型亚单位疫苗中的用途。

本发明将报道的HP0197、HP1036和Enolase基因转移到大肠杆菌BL21中，分泌该抗原蛋白的大肠杆 菌已于2008年10月9日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏具体保 藏信息如下：

1、大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET-28a-0197，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)， 保藏编号为CCTCC NO：M208146(在申请号为2008102253466申请案的母体专利中已经公开，其公开号为： CN101412984)。