[发明专利]百合抗病性植株的离体快速培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物培养方法，尤其是一种百合抗病性植株的离体快速培养方法，属于植物培育技术领域。

背景技术

百合(Lilium)是世界上重要的商品花卉之一，近年来生产和消费呈逐年上升趋势。据统计，目前全球百合种球的贸易额达20多亿美元，年贸易量超过25亿粒以上。东方百合杂种群主要利用天香百合(L.auratum)的花型和药百合(L.speciosum)的深红、深粉、粉色等艳丽的花色及其芳香宜人的遗传特性，培育出的具有靓丽的花型和鲜艳色泽的各种百合新品种。近年来，东方百合杂种的栽培面积越来越大，在切花生产中占据重要地位。但病虫害问题一直是制约切花百合质量提高的首要因素。由土传真菌Fusarium oxysporum f.sp.lilii引起的种球基盘腐烂是百合最严重的病害之一，全世界百合种植区均有感染和为害的报道。

为有效控制百合种球基盘腐烂而引起枯萎的病害，多年来国内外科研工作者对这种病害的病原生物学、病害流行学以及防治方法等方面进行了研究，摸清了百合枯萎病菌的习性和枯萎病的发生规律，然而，对其防治，迄今主要采取化学方法。但化学防治会带来环境方面的问题。选育和合理利用抗病品种是防治百合枯萎病的有效手段之一。但通过常规杂交选育百合新品种是一个漫长的过程，通常培育一个百合新品种至少需要10年以上的时间，采用体细胞离体筛选技术，可加速抗性育种进程。

高等植物抗病突变体的离体筛选，是利用组织培养技术，采用病菌毒素或毒素类似化学物质，在细胞水平上选择抗病突变体的新技术，是高等植物抗病育种微生物化的一种尝试。利用病原菌毒素或类似物质作为选择剂，已筛选出抗甜菜褐斑病、抗油菜黑胫病、抗烟草野火病、抗水稻纹枯病、抗玉米小斑病、抗小麦赤霉病、抗草莓灰霉病、抗茄子黄萎病、抗番茄晚疫病、抗西瓜枯萎病和抗香蕉枯萎病等突变体。但在百合上面，还没有做过相关的尝试。

发明内容

本发明的目的在于提供一种百合抗病性植株的离体快速培养方法。

本发明在东方百合组织培养过程中，利用镰刀菌毒素粗提液对组织细胞进行抗性突变体筛选，以获得抗镰刀菌的育种中间材料——百合植株。

本发明通过下列技术方案完成：一种百合抗病性植株的离体快速培养方法，其特征在包括下列步骤：

A、将消毒灭菌处理过的花丝、鳞片在无菌环境中，接种在pH为5.8～6.0的下列诱导培养基中：

MS培养基

2，4-D      1.0-8.0mg/L

Picloram    1.0-8.0mg/L

KT          0.1-1.0mg/L

ABA         0.1-1.0mg/L

TDZ         0.01-0.05mg/L

糖          30-40g/L

琼脂        6g/L

并在温度为22～28℃，全黑暗条件下诱导培养至形成愈伤组织；

B、将上述愈伤组织置于pH为5.8～6.0的下列继代培养基中：

MS培养基

Picloram    1.0-2.0mg/L

KT          0.1-0.5mg/L

ABA         0.1-0.5mg/L

TDZ         0.01-0.05mg/L

糖          30-40g/L

琼脂           6g/L

在温度为22～28℃、全黑暗条件下进行继代培养，每20天继代一次，继代三次后得到继代愈伤组织；

C、将上述继代愈伤组织接种在含有镰刀菌毒素的pH为5.8～6.0的下列选择培养基上：

MS培养基

Picloram                            1.0-2.0mg/L

TDZ                                 0.01-0.05mg/L

水解酪蛋白                          300-600mg/L

酵母提取物                          300-600mg/L

体积浓度为60～80％的镰刀菌毒素液    0.3-0.4L/L

在温度为22～28℃，全黑暗条件下培养7-10天；

D、将上述步骤C培养存活的愈伤组织转入下列pH为5.8-6.0的继代培养基上：

MS培养基

KT         0.1-0.5mg/L