[发明专利]DNA适体修饰的生物电化学传感器及其制备方法无效

专利信息
申请号: 201010152322.X 申请日: 2010-04-20
公开(公告)号: CN101825597A 公开(公告)日: 2010-09-08
发明(设计)人: 李根喜;陈桂芳;刘月星;李婷;陈震宇;陈琳 申请(专利权)人: 上海大学
主分类号: G01N27/26 分类号: G01N27/26;G01N27/327
代理公司: 上海上大专利事务所(普通合伙) 31205 代理人: 陆聪明
地址: 200444*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: dna 修饰 生物 电化学传感器 及其 制备 方法
【说明书】:

技术领域

发明涉及一种新型生物电化学传感器及其制备方法,特别是一种DNA适体修饰的新型生物电化学传感器及其制备方法。

发明背景

癌症,是当今社会中存在的严重威胁人类身体健康的疾病之一。其中,急性淋巴细胞白血病对于孩子们身体健康的威胁尤其明显。据文献报道,在患急性淋巴细胞白血病病人中有接近三分之二是儿童。并且,在现有的治疗手段中,低治愈率以及高复发率也是癌症治疗过程中存在的问题。然而,若在癌症早期即能被诊断出来的话,则将大大提高病人的存活率,并且也有研究证明,早期诊断和及时治疗是提高病人存活率的有效方法之一。因此,针对癌症的分子水平特征,进行癌症早期诊断的研究就显得极为重要。

电化学生物传感器是一类以电极作为信号转换器,以电位或电流加以测量的生物传感器。电化学体系借助电极实现电能的输入或输出,从而获得电极表面修饰物质的电信号,常用的为三电极体系。三电极体系包括工作电极、辅助电极(也称对电极)和参比电极,电流流经工作电极和对电极。工作电极所测得的电位是相对于参比电极而言。电化学作为一种分析检测方法,具有设备低廉、灵敏度高、简便快捷等优点。具体包括以下几种方法:

1.循环伏安法是最常用的一种方法,它在解释电子传递机理方面有独特的优势;

2.示差脉冲法则拥有更高的灵敏度,因此常用作检测;交流阻抗法在表面表征方面具有独特的优势,因而常用来辅助表征电极的表面状态。

3.在表面表征方面,显微镜技术具有直观可靠的优点。

近来,研究人员报道了一种称作适体的分子探针。适体为单链DNA、RNA或是经过修饰的核酸,是通过一种体外选择过程SELEX(指数富集的配体系统进化)产生的。在SELEX技术中,能从大量的单链随机寡核苷酸文库中筛选出能与靶物质高特异性、高亲和力结合的核酸配基,即为适体。在已经报道的文献中,适体可以结合小分子物质诸如三磷酸腺苷(ATP),或是大分子物质如蛋白质,甚至可以与细胞特异性结合。由于具有高特异性识别靶物质、低分子量、合成简便、易于修饰、低毒性、高稳定性等特点,适体越来越多被应用于各项研究以及生物传感器的设计。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种DNA适体修饰的新型生物电化学传感器。用以癌细胞的早期诊断。

本发明的目的之二在于提供该传感器的制备方法。

为达到上述目的,本发明采用如下技术方案:

一种DNA适体修饰的新型生物电化学传感器,为三电极体系传感器,其特征在于所述的三电极中的对电极是铂电极,参比电极是饱和甘汞电极,工作电极为金电极,在该金电极上修饰有DNA适体链。

上述的DNA适体链为带有巯基的CCRF-CEM急性白血病细胞的DNA适体链。

上述的带有巯基的CCRF-CEM急性白血病细胞的DNA适体链为:5’-HS-(CH2)6-ATCTA ACTGCTGCGC CGCCG GGAAA ATACT GTACG GTTAG A-3’。

一种制备上述的DNA适体修饰的新型生物电化学传感器的方法,其特征在于该方法的具体步骤为:将处理过的金电极置于1M H2SO4中,在0-1.5V电压范围内进行循环伏安扫峰,扫速设置为100mv/s,至达到稳定;然后在氮气中吹干该金电极后,将该金电极置于含有巯基DNA适体链的溶液的Eppendorf管中,该溶液含有浓度为0.05pM~50pM的HS-DNA适体,10mM Tris-HCl,1mM EDTA,1M NaCl和0.5μM的pH为8.0的TCEP,倒置16小时,再浸入1mM MCH水溶液中2小时,用超纯水冲洗,并用氮气吹干,即得到DNA适体修饰的金电极,该金电极与铂电极和饱和甘汞电极一起组成三电极体系的生物电化学传感器;所述的HS-DNA适体为:5’-HS-(CH2)6-ATCTA ACTGC TGCGC CGCCG GGAAA ATACT GTACGGTTAG A-3’。

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