[发明专利]一种建立溃疡性结肠炎化学诱癌动物模型的方法

说明书

技术领域  本发明涉及生物医学领域，具体涉及炎症性肠病、结肠原位癌及动物模型制备领域，更具体涉及一种溃疡性结肠炎化学诱癌的动物模型，以及建立该模型的方法及其用途。

背景技术  溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一类病因未明的肠道非特异炎性疾病，本病具有难治性、易复发、癌变倾向的特点。调查发现，溃疡性结肠炎患者结直肠癌的发生率10年为2％，20年为8％，30年之后达18％。在UC患者的死因中，癌症占到10％～15％的比例，UC致癌已成为当前研究的热点之一。由于临床研究中收集患者标本耗时长，且药物干预受诸多条件限制，相对来说动物模型是较理想的替代研究途径。目前报道的此类模型主要有自发型、基因工程型和化学诱变型，后者具有造模价格低、方法简便的特点，且能在病理及分子机制方面较好模拟人类肠炎相关的结直肠癌，可应用于大部分相关研究。当前建立的该种动物模型要么造模时间较长，多在20周左右，要么死亡率高、致癌效果不稳定，目前尚无成熟稳定的动物模型出现，因此建立一种科学性、重复性、稳定性的动物模型具有重要意义，可以此为基础深入探讨非特异性肠炎癌变的分子机制，并进一步研究药物治疗UC化学致癌的疗效及作用机制。

发明内容

本发明的目的一方面是建立一种溃疡性结肠炎化学诱癌的动物模型，提供该模型的具体方法，另一目的是提供上述模型的用途。

本发明第一方面是提供溃疡性结肠炎化学诱癌的动物模型的方法，包括以下主要步骤：

(i)实验前一天给以雌性Balb/c小鼠一次性腹腔注射偶氮氧甲烷(azoxymethane，AOM)作为致癌刺激，剂量为100mg/kg。

(ii)实验第一天在饮水中加葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium，DSS)饲喂，浓度为3％和5％，喂养一周，然后撤下药水改正常饮水喂养2周。

(iii)重复(ii)2个循环。

(iv)在第9周末处死小鼠，纵行剖开结肠，拍摄大体肿瘤，取肿瘤肠段福尔马林固定，切片HE染色观察肿瘤病理分期。

另一方面，本发明的用途包括：本实验最终得到两种浓度的癌变模型，3％DSS者病理为中度不典型增生，药物治疗可以逆转，适用于研究比较药物的疗效及新药抗癌治疗观察。5％DSS者病理为重度不典型增生或原位癌，对药物治疗不如3％DSS敏感，更适合于研究肠炎癌变的分子机制。

本发明的主要优点在于：造模时间缩短为9周，因此可缩短药物实验的时间。3％和5％两组死亡率低，仅有后组10％(1/10)的死亡率。实施方法简单，仅实验前腹腔注射一次致癌剂，后续采用DSS维持炎症方便。最主要优点在于两组的病理分期具有明显差异，即3％组均为中度不典型增生，而5％组为重度不典型增生或原位癌，说明本发明非常稳定、实用。

附图说明

图1为本发明结肠肿瘤大体观，标尺11～13cm处可见远端结肠肿瘤

图2为本发明正常结肠病理光镜图(HE，×400)

图3为本发明3％DSS组结肠肿瘤病理光镜图(HE，×400)

图4为本发明5％DSS组结肠肿瘤病理光镜图(HE，×400)

具体实施方式

实施例1 建立3％ DSS溃疡性结肠炎AOM化学致癌动物模型

1.1实施步骤：

1.1.1选取体重17～20g的4～6周龄雌性Balb/c小鼠20只，清洁级，由中科院上海实验动物中心提供，生产许可证号“SCXK(沪)2007-0005”，随机分为正常组和实验组，每组10只。DSS选取分子量3.6～5万Da。全部小鼠每周称量体重一次。正常组不做任何药物干预。实验组于实验前一天腹腔注射AOM 10mg/kg。实验第一天饮水换为3％DSS溶液，喂养一周，然后换正常饮水2周，这样3周算一个循环，如此总共进行3个循环共9周时间。

1.1.2 9周末全部小鼠眼球采血，离心分装，ELISA法备测C-反应蛋白(CRP)含量反应炎症活动度。全部小鼠处死，分离结肠，纵行剖开生理盐水洗净拍照。选取肿瘤部位(正常组选取结肠中间部位)肠段中性甲醛固定24小时，脱水石蜡包埋切片，做HE染色观察。

1.2现象及结果

1.2.1动物表现：