[发明专利]基于磁珠提取细菌基因组试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种基于磁珠提取细菌基因组DNA的试剂盒，包括溶菌酶工作液、细菌重悬裂解液、RNA酶工作液、菌体蛋白沉淀液、磁珠、异丙醇、漂洗液、DNA洗脱液；

溶菌酶工作液：10-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐，PH值7.0-8.0、1-4mmol/L螯合剂、体积分数0.8-1.2％Trition-X-100，溶菌酶的终浓度为20-30mg/mL；

细菌重悬裂解液：10-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐，PH值7.0-8.0、1-4mmol/L螯合剂、50-100mmol/L Na盐、质量浓度2-4％的十二烷基硫酸钠和终浓度0.1-0.4mg/mL的蛋白酶K；

RNA酶工作液：为核糖核酸酶A，其终浓度10-20mg/mL；

菌体蛋白沉淀液：5-8mol/L胍盐、2-3mol/L Na盐，PH值6.5-7.5；

磁珠：粒径1-2μm的单分散磁性微球；

异丙醇：分析纯的异丙醇；

漂洗液：10-20mmol/L Tris盐，PH值6.8-7.2、100-200mmol/L Li盐、1-4mmol/L螯合剂与无水乙醇按1∶3-5的体积比混合而成；

DNA洗脱液：10-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷，PH7.5-8.5。

2.一种权利要求1所述试剂盒的提取方法，其特征在于，提取步骤为：将1-2mL供提取细菌培养液放入1.5～2.0mL离心管中，离心8000-10000r/min、3-5min，倒掉培养液并尽量吸净；加溶菌酶工作液100-300μl，涡流混匀，室温～37℃，10-30min；加细菌重悬裂解液：150-250μl，混匀，65-70℃、10-20min；加RNA酶工作液5-15μl混匀，室温放置5-10min；加菌体蛋白沉淀液：250-500μl，上下颠倒数次，混匀，离心12000r/min，3-5min，贴上清表面吸取350-700μl，放到另一离心管中；加入10-20μl磁珠、200-400μl异丙醇，水平转动1-2min；磁分离至完全清澈，吸去上清，加漂洗液600-800μl，重悬磁珠核酸复合物，清洗2-3次；放在磁分离器上尽量吸去乙醇，20～37℃放置，直至闻不到酒精气味；加50-80μl DNA洗脱液，至离心管于55-65℃水浴锅中5-10min，以完全洗脱基因组DNA；磁分离30-40s，吸取上清于另一离心管中，备用或-20℃储存。