[发明专利]一种土壤环境中痕量天然及合成雌激素含量的检测方法

权利要求书

1.一种土壤环境中痕量天然及合成雌激素含量的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)土壤样品预处理

取5g经冷冻干燥后土壤样品，采用快速溶剂萃取仪进行萃取，萃取剂为丙酮，其溶剂量为120-140mL，所采用的快速溶剂萃取条件为：温度60℃，压力1500pis，静态提取2次，各8min。Waters公司的HLB固相萃取柱活化的顺序为：5mL色谱纯乙酸乙酯、5mL色谱纯甲醇及10mL超纯水，流速为1mL/min；取上述快速溶剂萃取仪的萃取液30mL，加入600mL蒸馏水后混匀，采用已活化的固相萃取柱对该混合液进行固相萃取富集，控制流速为3mL/min；萃取结束后真空抽干HLB柱5min，以去除水分；利用2×3mL乙酸乙酯洗脱HLB柱，控制流速为1mL/min，洗脱液收集于10mL玻璃离心管中；洗脱液在氮气流下缓慢吹干，加入200μL乙腈/水(v/v)＝1∶1，漩涡混合；冷藏等待浓度测定。

(2)利用液相色谱-串联质谱联用分析雌激素浓度

色谱柱：Nova-Pak C18，3.9mm×150mm×4μm；

梯度洗脱：采用甲醇和pH＝10的氨水为流动相，甲醇的比例在0-1.2min内由15％升到70％，1.2-2.0min内升到90％，2.0-3.0min内升到98％，3.0-6.1min维持在98％，6.1-6.2min内降至15％，6.2-10min内维持在15％，以上百分比均为体积百分比。

(3)标准曲线的绘制，以外标法进行定量测定。

(4)样品的测定

采集待测土壤样品，按步骤(1)对土壤样品进行预处理，再按步骤(2)进行液相色谱-串联质谱联用检测，并与步骤(3)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测土壤样品中天然和合成雌激素的含量。

2.根据权利要求1所述土壤环境中痕量雌激素含量的检测方法，其特征在于，还包括采用浸泡加标方式测定回收率的步骤，添加量为0.5ng/g。

3.根据权利要求1所述土壤环境中痕量雌激素含量的检测方法，其中所述的天然雌激素为雌酮、17β-雌二醇和雌三醇，合成雌激素为17α-乙炔基雌二醇。