[发明专利]用于生物检测的卷烟主流烟气总粒相物样品的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于生物检测的卷烟主流烟气总粒相物样品的制备方法，具体为卷烟主流烟气总粒相物(也称烟气冷凝物样品)的制备方法，属烟草及卷烟安全性评价技术领域。

背景技术：

卷烟烟气总粒相物样品(也称烟气冷凝物样品)的制备是卷烟主流烟气生物学活性检测中重要的环节，在烟气毒理学评价中，将烟气冷凝物样品用于细菌回复突变试验、细胞毒性试验和微核试验等生物学活性检测。目前文献报道的用于生物活性检测的烟气样品制备方法有多种。国内文献[1]报道采用乙酸乙酯和细胞培养液来吸收捕集全部烟气冷凝物。国内文献[2]的方法是：将收集在玻璃纤维滤片上的TPM用丙酮洗脱，洗脱液旋转减压蒸发，提取物以干氮气吹干(操作时温度控制在40℃以下)，溶于二甲基亚砜，贮于-20℃备用。国内文献[3]的方法是：将收集20支卷烟TPM的滤片粉碎，置于烧杯中，加入200ml二氯乙烷，25℃下浸泡过夜，置于调温磁力搅拌仪上25℃下搅拌60min，过滤滤液于N₂下吹干，称重后用二甲亚砜(DMSO)溶解，并定容至5ml，摇匀，得TPM原液，-80℃下保存。本实验室收集烟气总粒相物的方法文献[4]为：将剑桥滤片加入适量的丙酮浸泡过夜，将丙酮溶液用滤纸过滤后，倒入蒸发瓶中，用旋转蒸发仪将丙酮挥发成粘稠状，再将其放入三角瓶中置于50℃水浴锅中将丙酮挥干，然后将三角瓶用锡箔纸封好口放置到-20℃冰箱中保存。进行致突变性检测时取出根据所需浓度称取干焦油用DMSO溶解。这些现有制备烟气总粒相物方法的过程均很繁杂。国外文献[5-6]对烟气冷凝物的制备采用二甲基亚砜，但没有报道具体操作过程。

重要参考文献：

1.谢剑平，刘惠民，朱茂祥等人，卷烟烟气危害性指数研究，烟草科技，2009，259(2)：5-23。

2.刘宝法等人，不同类型烟草焦油致突变性的研究，中国烟草，1996，(3)：15-21。

3.王琴美，兰勤娴，吴嘉彤等，部分国产烤烟型卷烟烟气冷凝物的中型红细胞毒性试验，烟草科技，2007，238(5)，41-43。

4.夭建华、陈章玉、吴平艳等，卷烟烟气的毒理学指标与其重要有害成分之间的相关性，烟草科技，2005，221(12)：17-20。

5.Doolittle D J，Bombick D W.Evaluation of the genotoxic and cytotoxicpotential of mainstream whole smoke and smoke condensate from a cigarettecontaining a novel carbon filter.Fundam Appl Toxicol，1997，39(1)：11-7。

6.Bombick B R，Murli H，Avalos J T，et al.Chemical and biological studies of anew cigarette that primarily heats tobacco.Part 2.In vitro toxicology of mainstreamsmoke condensate.Food Chem Toxicol，1998，36(3)：183-190。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术之不足，而提供一种简单快速的用于生物

检测的卷烟主流烟气总粒相物样品的制备方法。

本发明是在现有技术基础上改进而成，改进点如下：

1、直接将捕集了卷烟主流烟气总粒相物(TPM)的剑桥滤片加入有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)浸泡，超声波提取20分钟，用滤纸过滤后分装到2ml冻存管中，保存于-70℃超低温冰箱中备用。

2、有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)的加入量按10mgTPM/ml进行，一次加入，无需定容。

本发明的优点在于操作步骤简便，能真实反映出烟气总粒相物的致突变性。

附图说明：

图1为3种有机溶剂(二甲基亚砜、丙酮和二氯甲烷)提取TPM后，采用Ames试验平板掺入法检测同一样品致突变性的结果比较图。

具体实施方式：

1、烟气总粒相物的3个制备方法

将卷烟在恒温恒湿箱中平衡48小时，选取重量和吸阻一致的卷烟。按国标方法，分别在吸烟机上抽吸20支卷烟，同一个样品抽吸三次，滤片标为1、2、3。第1个剑桥滤片按10mgTPM/ml加入DMSO浸泡(剑桥滤片吸烟前进行称重)，

2、3个不同的提取方法检测烟气总粒相物的致突变性比较研究