[发明专利]一种卷烟烟气总粒相物致突变性的检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种卷烟烟气总粒相物致突变性的检测方法，属于烟草及卷烟烟气安全性评价技术领域。

背景技术：

Ames试验是一种检测外源化合物短期致DNA突变的实验方法，其基本原理是利用外源化合物诱导组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌回复突变的特性来检测外源化合物的致突变能力。它是国际上公认的化学致突变剂检测的常规方法，也是近二十年食品毒理检测以及环境化学诱变剂检测等的主要方法之一。该试验能灵敏检测出卷烟烟气总粒相物诱发的潜在遗传危害，并且结果较为可靠，因此成为国内外评价烟草制品毒性的首选方法之一。

目前Ames试验平板掺入法最权威的当属食品毒理检测标准。本发明根据食品毒理检测标准上的操作步骤以及给定的药品的参数，用于卷烟烟气总粒相物的致突变检测。食品标准文献[1]中组氨酸浓度为17.435mg/250ml，顶层培养基数量为2.0ml，顶层保温温度45℃。但根据上述反应体系无法检测出卷烟烟气总粒相物的致突变性，其自发回变菌落数也很少，有时甚至没有。而国外文献[2-4]和专利报道文献[8]的方法却是采用预培养法，缺点是增加操作步骤，费时间。食品毒理检测标准上阳性物2-氨基芴和叠氮钠浓度分别为10ug/皿、1.5ug/皿，对于阳性物来说，使用剂量偏高，对操作人员的安全性风险增高。食品毒理检测中样品的浓度为0.1ug-5mg/皿，一般选4-5个剂量。对于卷烟烟气总粒相物来说，这个剂量范围不合适，太宽，无法反应出卷烟烟气总粒相物的剂量-反应关系。

重要参考文献：

1.中华人民共和国国家标准，食品安全性毒理学评价程序和方法(GB 15193-94)

2.DeMarini D.M.，Genetoxicity of tobacco smoke and tobacco smokeCondensate，Mutation Research，t983，114：59-89

3.DeMarini D.M.，Mutation spectra of comlex mixtures，Mutation Research，1998，411：11-18

4.Doolittle，D.J.，C.K.Lee，et a1.，Genetic toxicology studies comparing theactivity of sidestream smoke from cigarettes which burn or only heattobacoo，Mutation Research，1990，240：59-72

5.刘宝法等人，不同类型烟草焦油致突变性的研究，中国烟草，1996，(3)：15-21

6.张冬生等人，不同烟具过滤后的烟草凝聚物致突变性比较，卫生研究，1992，21(5)：240-243

7.夭建华，蔡荣等，烟丝中添加天然植物制剂AML-1降低卷烟焦油致突变性的研究.中国烟草学报，1999，5(3)，22-25

8.专利：一种改进的卷烟烟气冷凝物Ames试验。公开号：CN101671735。

发明内容：

本发明目的在于克服食品毒理评价标准中Ames试验在检测卷烟烟气总粒相物致突变性中的不足之处，而提供一种卷烟烟气总粒相物致突变性的检测方法。

本发明在现有技术的经常基础上改进而成。本发明根据影响Ames试验结果的几个重要因素，结合卷烟烟气总粒相物这个特殊混合物，对组氨酸的浓度、顶层培养基所加的量以及保持顶层培养基不会凝固的温度进行改进，具体为：

a.组氨酸的量为20-25mg/ml、顶层数量为2.5ml、顶层保温温度43℃；

b.卷烟烟气总粒相物的致突变性的剂量范围为25--500ug/皿，在这个剂量范围内，能很好地检测出剂量-反应关系；

c.降低阳性物的剂量，减少保护操作人员的健康风险；TA98菌株阳性物采用2-氨基芴，剂量低于10ug/皿，为1-10ug/皿；TA100菌株阳性物采用叠氮钠，剂量低于1.5ug/皿，为0.15-1.5ug/皿。

本实验室经过改进上述反应体系以后确定了卷烟烟气总粒相物的浓度，根据卷烟烟气总粒相物的浓度检测致突变性结果见表2。

表1平板掺入法测定阳性物(2-氨基芴和叠氮钠)对TA98和TA100菌株的致突变性结果

表2 10个不同卷烟烟气总粒相物致突变性结果