[发明专利]能同时检测铜绿假单胞菌等6种水产病原菌的检测试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及一种水产病原菌的检测试剂盒，具体涉及一种能够同时检测铜绿假单胞菌、 嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌六种水产病原菌的检测 试剂盒。

背景技术：

铜绿假单胞菌、嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌均 为水生动物常见的病原菌。监测养殖动物和养殖水体中这些病原菌的存在是防治相关水产动 物疾病的重要措施。目前鉴定上述细菌的技术有：1、细菌快速自动鉴定系统，该法需要昂贵 的仪器设备和技术熟练的操作人员；2、基于核酸的检测技术，虽然具有快速、简洁和灵敏的 特点，但该法需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员；3、经典的生理生化鉴定方法，该 法虽然经典、准确，但是不同的科属的鉴定指标有所区别，但基本上都是糖类发酵、酶测定、 生化测定盐类利用、色素产生、动力试验等10多大类，光糖类发酵就有40多种，酶测定有 20多种，因此繁琐、耗时、且要求操作人员有良好的专业素质。由于铜绿假单胞菌、嗜水气 单胞菌、迟钝爱德华氏菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌六种细菌分属2大类，铜绿假 单胞菌为非发酵型革兰氏阴性杆菌，假单胞菌属；嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、 创伤弧菌和迟钝爱德华氏菌为发酵型革兰氏阴性杆菌，其中嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶 血弧菌和创伤弧菌为弧菌科细菌，迟钝爱德华氏菌为肠杆菌科细菌。按照经典的生理生化鉴 定方法，如需鉴定上述六种水产病原细菌，则需分别进行鉴定，且鉴定的指标差别较大，指 标多，操作很繁琐。目前还未见能简单、同时检测铜绿假单胞菌、嗜水气单胞菌、迟钝爱德 华氏菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌6种水产病原菌试剂盒的相关报道。、

发明内容：

本发明的目的是提供一种快速、简易、能够同时检测铜绿假单胞菌、嗜水气单胞菌、迟 钝爱德华氏菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌6种水产病原菌的检测试剂盒。

本发明人针对上述6种水产常见病原菌，研究分析水产常见病原菌不同生理生化特性， 通过归纳分类、筛选和试验验证，选定其中的16种指标，利用这16种指标能够快速，简易 的将待测菌进行分类，从而实现了本发明的目的。

本发明的同时检测铜绿假单胞菌等6种水产病原菌的检测试剂盒，由下列试剂组成：(1) 氧化酶试纸、(2)硫化氢培养基、(3)嗜盐性鉴定试剂、(4)邻硝基酚β-D-半乳糖苷培养 基(ONPG)、(5)阿拉伯糖培养基、(6)乳糖培养基、(7)蔗糖培养基、(8)葡萄糖培养基、 (9)甘露糖培养基、(10)纤维二糖培养基、(11)葡萄糖氧化发酵鉴定试剂、(12)精氨酸 双水解酶鉴定试剂、(13)鸟氨酸鉴定试剂、(14)赖氨酸鉴定试剂、(15)氨基酸脱羧鉴定试 剂和(16)吲哚鉴定试剂。

所述的氧化酶试纸是用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶。

所述的硫化氢培养基是用于检查细菌能否产生硫化氢，该培养基的优选配方为按质量分 数100％计，含有蛋白胨2％，牛肉膏粉0.5％，氯化钠0.3％，硫代硫酸钠0.02％，硫酸亚铁 0.02％，琼脂0.6％，余量为水，PH 7.4。

所述的嗜盐性鉴定试剂用于检查细菌对盐类的耐受性，该培养基优选由两个培养基组成， 分别为无盐胨水(0％NaCl)培养基：按质量分数100％计，含有胰蛋白胨1％，余量为水， PH 7.7-7.8；盐胨水(6％NaCl)培养基：按质量分数100％计，含有胰蛋白胨1％，氯化钠6％， 余量为水，PH 7.7-7.8；

所述的邻硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)培养基是用于检查细菌产生β-半乳糖苷酶的 能力，该培养基优选配方为按质量分数100％计，含有邻硝基酚β-D-半乳糖苷0.15％， 0.01mol/LPH 7.5磷酸缓冲液25％，蛋白胨0.75％，余量为水，PH7.5。

所述的阿拉伯糖培养基、乳糖培养基、蔗糖培养基、葡萄糖培养基、甘露糖培养基、纤 维二糖培养基，这些糖类分解培养基是用作检查细菌对糖类发酵的特性，观察被检细菌的产 酸能力。

阿拉伯糖培养基的优选配方为按质量分数100％计，含有牛肉膏粉0.5％，蛋白胨1％，氯 化钠0.3％，磷酸氢二钾0.2％，阿拉伯糖1％，溴百里酚蓝0.003％，余量为水，PH 7.4。