[发明专利]一种根据烟叶加工实际温度来测定烟叶酶活力的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种根据烟叶加工实际温度来测定烟叶酶活力的方法，属于烟草应用技术领域。

背景技术：

烟叶的加工过程使烟叶品质发生了很大的变化，如自然陈化、打叶复烤、润叶和制丝过程。普遍认为，烟叶酶对烟叶品质的形成起了重要作用。例如：α-淀粉酶是烟叶中的淀粉降解的重要酶。蛋白酶烟草蛋白质降解的重要酶。多酚氧化酶是烟叶中酶促棕化反应的重要酶，可使多酚氧化生成与香气有关的物质，并使烟叶颜色加深。脂氧合酶是类胡萝卜素降解的关键酶，类胡萝卜素在脂氧合酶作用下氧化分解的中间产物香叶醇、紫罗兰酮、紫黄质、黄质醛等是烟叶重要的致香物质，对烟叶香气品质的改善具有重要意义。苯丙氨酸裂解酶是烟叶苯丙氨酸代谢中的重要酶，烟叶中许多重要挥发性香气成分如苯甲醇、苯乙醇等的形成与其代谢有密切关系。根据大量文献报道，这五种酶对烟叶品质的形成有重要影响。

因此，为了深入了解烟叶加工过程中各种工序对烟叶品质形成的作用，通常需要测定烟叶酶活力的变化。文献报道烟叶酶活力的测定方法主要来自于植物生理学，测定温度都是各种酶的最适宜反应温度(即标准温度)，范围从37℃--40℃。例如α-淀粉酶为37-40℃，蛋白酶为37℃，多酚氧化酶为35-37℃，脂氧合酶为35℃和苯丙氨酸裂解酶为30-35℃。重要文献如下：

1.朱广廉，钟诲文，张爱琴；植物生理学实验；北京大学出版社：1990年

2.李合生；植物生理生化实验原理和技术；高等教育出版社：2000年

3.中国科学院上海植物生理研究所，上海市植物生理学会编；现代植物生理学实验指南；科学出版社：1999年

4.Berkely H D.Measurement of Lipoxygenase activity in crude and partiallyrurified potato extracts.J.Food.Sci.，1976，15：1475～1479.

5.张志良.植物生物化学技术与方法.北京：农业出版社，1986.

6.赵铭钦，邱立友，张维群，等；陈化期间烤烟叶片中生物活性变化的研究；华中农业大学学报，2000，19(6)：537-542

7.宫长荣，林学梧，李艳梅；烟叶在烘烤过程中脂氧合酶活性及其作用的研究；西北农业大学，1999，8(4)：63-66

8.朱大恒，陈再根，陈锐，等；烤烟自然醇化与人工发酵过程中微生物变化及其与酶活性关系的研究；中国烟草科学，2001，2：26-30

文献报道的测定温度是酶活力达到最大值时的最适宜温度，并没有考虑烟叶加工过程中的实际温度。在实际温度下，各种酶反应无法达到最适宜温度，因此，如果按照标准温度测定，就无法真实了解实际烟叶加工过程中的酶活力变化。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术不能反应烟叶加工过程中酶活力的真实情况的不足，而提供一种根据烟叶加工实际温度来测定烟叶酶活力的方法。

本发明根据烟叶加工实际温度，调整现有烟叶酶活力测定的温度，使之与烟叶加工过程中的实际温度相符合，更能客观反映烟叶加工过程中烟叶酶活力的影响，为探索通过酶作用提高烟叶品质提供更为客观的研究方法。

本发明的方法是在现有方法基础上的改进，其改进点在于：

1、在烟叶加工过程中酶活力的测定温度为加工实际温度。

本发明针对烟叶加工过程中不同工序有不同的加工温度，将酶活力测定的温度定为烟叶实际加工温度。

2根据不同陈化地点的环境温度来测定陈化烟叶的五种酶活力。

本发明选择了两陈化地点的环境平均温度来测定陈化烟叶的五种酶活力，环境平均温度为15℃或25℃，五种酶活力的标准检测温度为：α-淀粉酶为37-40℃，蛋白酶为37℃，多酚氧化酶为35-37℃，脂氧合酶为35℃和苯丙氨酸裂解酶为30-35℃。调整温度后测定的五种酶活力与标准测定温度下的酶活力明显差异，更能反映烟叶陈化的真实状况。

本发明的优点在于：更能客观反映烟叶加工过程中烟叶酶活力的影响，为探索通过酶作用提高烟叶品质提供更为客观的研究方法。

附图说明：

图1玉溪陈化烟叶两种测定温度下多酚氧化酶活力比较。

图2元江陈化烟叶两种测定温度下多酚氧化酶活力比较。

图3玉溪陈化烟叶两种测定温度下α-淀粉酶活力比较。

图4元江陈化烟叶两种测定温度下α-淀粉酶活力比较。

图5玉溪陈化烟叶两种测定温度下脂氧合酶活力比较。

图6元江陈化烟叶两种测定温度下脂氧合酶活力比较。