[发明专利]用于疫苗和基因治疗的重组流感病毒

权利要求书

1.一种基于质粒的系统，用于从克隆的病毒cDNA产生感染性流感病毒，其中，该系统含有多个足以在缺少辅助病毒时产生所述病毒的流感病毒载体，其特征在于，所述载体包含：

(i)至少六种载体，其选自含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒PA cDNA的启动子的载体、含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒PB1 cDNA的启动子的载体、含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒PB2 cDNA的启动子的载体、含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒HA cDNA的启动子的载体、含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒NP cDNA的启动子的载体、含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒M cDNA的启动子的载体、含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒NA cDNA的启动子的载体、含有操作性连接于已连接了转录终止序列的流感病毒NS2 cDNA的启动子的载体；

(ii)含有操作性连接于编码流感病毒PA多肽的DNA节段的启动子的载体；

(iii)含有操作性连接于编码流感病毒PB1多肽的DNA节段的启动子的载体；

(iv)含有操作性连接于编码流感病毒PB2多肽的DNA节段的启动子的载体；和

(v)含有操作性连接于编码流感病毒NP多肽的DNA节段的启动子的载体。

2.如权利要求1所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述病毒cDNA是突变的。

3.如权利要求1所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述基于质粒的系统产生至少1×10³pfu/ml感染性流感病毒。

4.如权利要求3所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述基于质粒的系统产生至少3×10⁴pfu/ml感染性流感病毒。

5.如权利要求1所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述启动子选自RNA聚合酶I启动子、RNA聚合酶II启动子、RNA聚合酶III启动子、T7启动子和T3启动子。

6.如权利要求5所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述启动子是RNA聚合酶I启动子。

7.如权利要求6所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述启动子是人RNA聚合酶I启动子。

8.如权利要求1所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述转录终止序列选自RNA聚合酶I转录终止序列、RNA聚合酶II转录终止序列、RNA聚合酶III转录终止序列和核酶。

9.如权利要求1所述的基于质粒的系统，其特征在于，两个或多个载体以物理方法连接。

10.如权利要求1所述的基于质粒的系统，其特征在于，所述一个或多个载体在分开的质粒上。

11.一种宿主细胞，它含有权利要求1所述的基于质粒的系统。

12.一种生产流感病毒病毒粒子的方法，该方法包括在使病毒蛋白和vRNA或cDNA生产的条件下培养权利要求11所述的宿主细胞。

13.一种制备流感病毒特异性免疫原性组合物的方法，其特征在于，该方法包括从含有多个权利要求1所述的流感病毒载体的宿主细胞中纯化出病毒粒子，其中，所述载体在不存在辅助病毒的情况下或在不存在体外核糖核蛋白复合物的情况下被导入所述宿主中。

14.一种免疫原性组合物，其特征在于，它含有根据权利要求13所述的方法制得的流感病毒病毒粒子。

15.权利要求14所述的免疫原性组合物的用途，其特征在于，用于制备用于免疫个体以抗流感病毒感染的药剂。

16.一种分离的流感病毒，它由权利要求12或13的方法制得。

17.一种无辅助病毒的基于质粒的系统，用于从克隆的病毒cDNA产生感染性流感病毒，该系统含有足以产生所述病毒的多个权利要求1所述的流感病毒载体。