[发明专利]基因表达技术

权利要求书

1.包含编码包含蛋白质二硫键异构酶(PDI)之序列的蛋白质的第一重组基因和编码包含基于运铁蛋白的蛋白质之序列的蛋白质的第二重组基因的宿主细胞。

2.依照权利要求1的宿主细胞，其中基于运铁蛋白的蛋白质包含运铁蛋白或运铁蛋白家族任何其它成员或其变体或片段或包含运铁蛋白或其变体或片段的融合蛋白的序列。

3.依照权利要求2的宿主细胞，其中基于运铁蛋白的蛋白质包含乳铁蛋白或其变体或片段或包含乳铁蛋白或其变体或片段的融合蛋白。

4.依照权利要求1、2或3任一项的宿主细胞，其中编码包含蛋白质二硫键异构酶(PDI)之序列的蛋白质的第一重组基因在质粒上提供。

5.依照权利要求4的宿主细胞，其中所述质粒是2μm家族质粒。

6.依照权利要求5的宿主细胞，其中所述质粒基于pSR1、pSB3或pSB4且所述宿主细胞是鲁氏接合糖酵母(Zygosaccharomyces rouxii)；所述质粒基于pSB1或pSB2且所述宿主细胞是拜列氏接合糖酵母(Zygosaccharomycesbailii)；所述质粒基于pSM1且所述宿主细胞是发酵接合糖酵母(Zygosaccharomyces fermentati)；所述质粒基于pKD1且所述宿主细胞是果蝇克鲁维氏酵母(Kluyveromyces drosophilarum)；所述质粒基于pPM1且所述宿主细胞是膜醭毕赤氏酵母(Pichia membranaefaciens)；或所述质粒基于2μm质粒且所述宿主细胞是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔斯伯糖酵母(Saccharomyces carlsbergensis)。

7.依照权利要求1、2、3或4的宿主细胞，其中编码包含蛋白质二硫键异构酶(PDI)之序列的蛋白质的第一重组基因整合在染色体中。

8.依照权利要求7的宿主细胞，其中编码包含蛋白质二硫键异构酶(PDI)之序列的蛋白质的第一重组基因在内源编码PDI基因的基因座处整合在染色体中。

9.依照权利要求8的宿主细胞，其中编码包含蛋白质二硫键异构酶(PDI)之序列的蛋白质的第一重组基因在内源编码PDI基因的基因座处整合在染色体中而没有破坏内源PDI基因的表达。

10.依照权利要求1至9任一项的宿主细胞，其中编码包含基于运铁蛋白的蛋白质之序列的蛋白质的第二重组基因在质粒上提供。

11.依照权利要求10的宿主细胞，其中所述质粒是2μm家族质粒。

12.依照权利要求11的宿主细胞，其中所述质粒基于pSR1、pSB3或pSB4且所述宿主细胞是鲁氏接合糖酵母；所述质粒基于pSB1或pSB2且所述宿主细胞是拜列氏接合糖酵母；所述质粒基于pSM1且所述宿主细胞是发酵接合糖酵母；所述质粒基于pKD1且所述宿主细胞是果蝇克鲁维氏酵母；所述质粒基于pPM1且所述宿主细胞是膜醭毕赤氏酵母；或所述质粒基于2μm质粒且所述宿主细胞是酿酒酵母或卡尔斯伯糖酵母。

13.依照权利要求1至9任一项的宿主细胞，其中编码包含基于运铁蛋白的蛋白质之序列的蛋白质的第二重组基因整合在染色体中。

14.依照权利要求13的宿主细胞，其中编码包含基于运铁蛋白的蛋白质之序列的蛋白质的第二重组基因在内源编码PDI基因的基因座处整合在染色体中。

15.依照权利要求14的宿主细胞，其中编码包含基于运铁蛋白的蛋白质之序列的蛋白质的第二重组基因在内源编码PDI基因的基因座处整合在染色体中而没有破坏内源PDI基因的表达。

16.依照权利要求1至15任一项的宿主细胞，其中所述PDI来自人、酵母、小麦、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardii)、大鼠、牛或鸡。

17.依照权利要求16的宿主细胞，其中所述PDI包含SEQ ID No.1或SEQ ID No.2或它们的变体或片段。

18.编码包含蛋白质二硫键异构酶(PDI)之序列的蛋白质的重组基因用于提高基于运铁蛋白的蛋白质表达的用途。