[发明专利]一种水稻DNA快速提取试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种从水稻中快速提取DNA应用于PCR反应的试剂盒。

背景技术

基于PCR技术为基础的分子标记已广泛地运用于种子纯度鉴定、亲缘关系的分析、 分子标记辅助育种、基因定位以及转基因植株检测等。尤其是，DNA分子标记辅助选择 育种已成为分子技术在作物改良中的一个重要应用，即通过对与表型紧密连锁的DNA分 子标记的筛选，以快速获取带目的表型的理想植株。随着生物技术的不断发展、水稻基因 组测序的完成、功能基因鉴定的日益增多，分子标记辅助选择育种越来越多地应用于作物 新品种改良。

为了应用PCR检测技术，人们需要从组织样品中提取DNA。然而，DNA提取是一项 耗费人力、物力的繁琐工作，提取的DNA也仅在筛选、鉴定时使用了很少的一部分，剩 余的大部分DNA将作为累赘而被废弃。尽管人们也一直致力于DNA抽提方法的探讨， 但目前应用的主要方法仍然烦琐费时。因此，在大规模的基于PCR的基因型检测作业中， 高效、快速、简便的模板DNA制备显得非常重要。

目前已公开的一种用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法(王兰、龙云铭、刘耀 光，分子植物育种.2009，7(2)：425-428)，存在着如下缺陷：

1、操作较费时，仅破碎组织样品的时间就需要5min；

2、仅能以叶片为原料进行提取，且最少要求有4mg的叶片；因此原料的适应性较差；

3、所得的DNA溶液主要用于短期使用：用TE制备的DNA在4℃下可保存10d以 上，在冷冻下可保存半年；不利于长期保存。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能从水稻组织中高效、快速、简便提取模板DNA 的水稻DNA快速提取试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种水稻DNA快速提取试剂盒，包括β-巯基乙醇、 作为预处理液的试剂A、作为提取缓冲液的试剂B和作为PCR反应缓冲液的试剂D；

试剂A包括100～200mM sorbitol(山梨醇)、100～150mM Tris(三羟甲基氨基甲烷)、 20～30mM EDTA-Na₂(乙二胺四乙酸二钠)、400～600mM NaCl、15～25mM Na₂SO₃、质 量浓度0.8％的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)和质量浓度2％的sarkosyl(N-十二烷基肌 氨酸钠)，其余为蒸馏水；pH7.5；

试剂B包括90～110mM Tris、450～550mM KCl、15～20mM MgCl₂和质量浓度1％的 Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)，其余为蒸馏水；pH9.0；

试剂D包括40～60mM Tris、200～300mM KCl、8～10mM MgCl₂、质量浓度0.5％的Triton X-100和体积浓度5～10％的BSA(牛血清白蛋白)，其余为ddH₂O(去离子灭菌水)；pH9.0。

作为本发明的水稻DNA快速提取试剂盒的改进：该试剂盒还包括蒸馏水、氯仿和钢珠。

作为本发明的水稻DNA快速提取试剂盒的进一步改进：

试剂A含有150mM sorbitol，125mM Tris，25mM EDTA-Na₂，500mM NaCl，20mM Na₂SO₃，质量浓度0.8％的CTAB，质量浓度2％的sarkosyl；其余为蒸馏水；pH7.5；

试剂B含有100mM Tris，500mM KCl，18mM MgCl₂，质量浓度1％的Triton X-100， 其余为蒸馏水；pH9.0；

试剂D含有50mM Tris，250mM KCl，9mM MgCl₂，质量浓度0.5％的Triton X-100， 体积浓度10％的BSA；其余为ddH₂O；pH9.0。