[发明专利]RALA基因的小干扰RNA在制备抗白血病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，特别涉及一种RALA基因的小干扰RNA及其在制 备抗白血病药物中的应用。

背景技术

慢性粒细胞性白血病是一种起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病，约 占成年人白血病的20％～30％，在我国白血病中发病率仅次于急粒和急淋而居 第三位，成为威胁人民健康的一种常见恶性肿瘤。目前CML尚缺乏特效的治 疗方案，以化疗为主。近年来，对白血病以及其他肿瘤的治疗已由“全细胞毒 杀”时代进入到目前的“靶向治疗”新纪元。寻求肿瘤恶性转化的关键“靶标” 或与肿瘤发生密切相关的基因，开发靶向药物已经成为肿瘤基因治疗研究的重 要方向。

RALA(v-ral simian leukemia viral oncogene homolog A)是一种癌基因， 它翻译的蛋白质类似于RAS基因翻译的连接于GTP上的连接蛋白，这种蛋白可 以与细胞膜上的受体结合，调节细胞内外物质的转运。研究表明RALA与肿瘤 发生、侵袭和转移相关，尤其在肿瘤发生过程中起重要作用。RNA干扰(RNA interference，RNAi)现象自1998年发现以来，作为一种反向遗传学技术，已 被成功应用于线虫、果蝇、植物、真菌和哺乳动物等生物的多个研究领域中。 小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)可特异性、高效率沉默靶基因表 达，能在低于反义核酸几个数量级的浓度下，使靶基因的表达降至极低水平。 本实验设计并合成RALA siRNA，将其导入慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)细胞株k562细胞，检测RALA siRNA的基因沉默功效。

RNAi是近几年发展起来的一种新型基因阻断技术，其主要参与成分为 siRNA，siRNA可特异性抑制靶目标mRNA的表达。RNAi具有高度的序列专一 性，可以特异性地使目的基因沉默，利用此技术沉默肿瘤相关基因，通过观察 细胞表型的改变、分析基因表达和功能的变化，不仅有助于了解肿瘤发生、发 展过程，而且有助于辨认和确定肿瘤基因治疗的靶点。目前，RNA干扰已广 泛应用于肿瘤研究工作中，并取得了一些突破性进展，在真核生物体内和体外 模型都证明了RNAi具有良好的基因沉默效应。由于RNAi具有特异、高效、毒 性小的特点，因此可以用来对一些肿瘤进行治疗。

发明内容

为了弥补现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种 RALA基因的小干扰RNA。

本发明的另一目的在于提供一种上述RALA基因的小干扰RNA的应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种RALA基因的小干扰 RNA(siRNA)，所述小干扰RNA的序列如下：

正义链为：5′-CGUGGAAACAUCUGCUAAATT-3′；

反义链为：5′-UUUAGCAGAUGUUUCCACGTA-3′。

上述的一种RALA基因的小干扰RNA可用于制备抗白血病的药物。

本发明的作用原理是：RALA是一种癌基因，它翻译的蛋白质类似于RAS 基因翻译的连接于GTP上的连接蛋白，这种蛋白可以与细胞膜上的受体结合， 调节细胞内外物质的转运。研究表明RALA与肿瘤发生、凋亡、侵袭和转移密 切相关，尤其在肿瘤发生过程中起重要作用。本发明RALA siRNA可以下调 RALA的表达，从而有效抑制人白血病k562细胞的生长，具有分子靶向抗白血 病的作用。

本发明与现有技术相比具有如下优点和有益效果：本发明设计合成RALA siRNA，将其导入人白血病K562细胞，发现RALA siRNA明显抑制细胞生长， 细胞内RALA mRNA的表达水平降低，RALA siRNA转染k562细胞48小时 后细胞生长受到明显抑制，持续至72小时(P＜0.05)；转染终浓度25nmol/L 的RALA siRNA即开始表现出对细胞生长的抑制活性，125nmol/L的RALA siRNA表现出非特异性抑制作用(P＜0.05)；RALA siRNA转染K562细胞48 小时后，RALA mRNA的表达水平显著降低；本发明RALA siRNA可以通过 下调癌基因RALA的表达抑制人白血病k562细胞生长，对肿瘤基因治疗具有 潜在的应用价值，有望将其应用于白血病的治疗，并在此基础之上，开发抗白 血病新药，为临床白血病的防治做出贡献。

附图说明