[发明专利]人gdnf基因在牛β-casein基因座的定位整合载体及其应用

权利要求书

1.人gdnf基因在牛β-casein基因座的定位整合载体，其包括正筛选基因，在正筛选基因的两端具有重组酶识别序列，所述重组酶识别序列的另一端分别与牛β-casein基因的5′同源臂和3′同源臂相连，人gdnf基因位于5′同源臂下游，所述5′同源臂的内部具有启动正筛选基因表达的启动子，在所述同源臂的外侧还具有负筛选基因。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述正筛选基因为编码新霉素磷酸转移酶的基因。

3.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述负筛选基因为HSV-tk基因和DsRed2红荧光标记基因。

4.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述重组酶识别序列为Cre酶识别序列。

5.根据权利要求1-4任一项所述的载体，其特征在于，扩增所述牛β-casein基因5′同源臂的引物为上游引物5′-GACGTCGACAAAACTTCCGTGTGTCCCAGC-3′和下游引物5′-GGCCTCGAGCTCCTGGGAATGGGAAGATGA-3′。

6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于，扩增所述牛β-casein基因3′同源臂的引物为上游引物5′-AAAGGATCCAGCAACAGACTAACAAGAAGG-3′和下游引物5′-CTCAGGATCCAAACATCGGCTTACTTG-3′。

7.根据权利要求6所述的载体，其特征在于，扩增所述人gdnf基因的引物为上游引物5′-GACCTCGAGATGAAGTTATGGGATGTCGTGGCTGTC-3′和下游引物5′-GAGCTCGAGTCAGATACATCCACACCTTTTAG-3′。

8.根据权利要求7所述的载体，其特征在于，所述人gdnf基因的下游连接有SV40polyA序列。

9.权利要求1-8任一项所述载体在基因打靶中的应用。

10.权利要求1-8任一项所述载体在制备表达人GDNF蛋白的牛乳腺生物反应器中的应用。