[发明专利]一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体片段及其单克隆抗体与应用。

背景技术

促性腺激素释放激素(GnRH)起初定义为十肽激素。它的功能是刺激促性腺激素的释放。通过与特定细胞膜外有GnRH受体的垂体前叶细胞特异性地结合，释放出如LH和FSH等促性腺激素。后续研究表明，GnRH与其受体还在垂体以外许多正常以及恶性细胞或组织中担当角色，可是在垂体以外细胞或组织的角色尚未被完全了解。然而，GnRH或其类似物对不同人体组织器官的癌细胞的抗增殖功效已经被报道。许多GnRH类似物连接细胞毒药物作为抗癌药的临床研究已经报道。事实上一部分抗癌药物就是制成GnRH或其类似物与抗癌细胞毒素成分，如：AN-152或AN-207的共价连接。另一部分则是用GnRH类似物及其拮抗性类似物作为抑制肿瘤生长的药物。与一般化疗药物相比，这些方法已经显现其治疗癌症的有效和低毒性。

与GnRH相类似，特异性针对细胞表面GnRH受体的单克隆抗体具有屏蔽受体功能，阻止体内外癌细胞的增殖活动或改变生殖功能。近年来以抗体为基础的抗癌药物的发展已经成为一种选择性的人体癌症治疗方法(Pawson，A.J.，Maudsley，S.，Morgan，K.，Davidson，L.，Naor，Z.，and Millar，R.P.Inhibition of human Type I Gonadotropin-releasing hormonereceptor(GnRHR)function by expression of a human Type II GnRHRgene fragment.Endocrinol.2005；146(6)：2639-2649)。

然而癌细胞表面的药物靶点应当明确且非常丰富，作用机理应当说明清晰。这种方法的优点是：减少副作用，并保持治疗用抗体药物在循环中的相对长半衰期(5-20天)。综合这些因素，抗GnRH受体单克隆抗体具有靶向的特异性和抑制癌症细胞生长的确实功效，将成为中和或杀死癌症细胞的理想选择。

抗GnRH受体单克隆抗体细胞株的制备

一般而言Kohler and Milstein的方法就足以完成制备所需适用的抗体；当然也有其他方法，如(J.L.，and Herzenberg.L.A.(1982)J.Immunlo.Meth.52：1.)

经过骨髓瘤细胞与血蓝蛋白结合GnRH受体肽(N1-29)免疫的哺乳动物脾细胞或外周血淋巴细胞融合，制造出能够分泌理想单克隆抗体的杂交瘤传代细胞株。特别需要指出的是骨髓瘤细胞株的来源必须与抗体分泌细胞同种。已经有成熟的骨髓瘤细胞株来源于小白鼠和大白鼠，这些哺乳动物可以产生高质量的多克隆抗血清和免疫球蛋白分泌细胞。任何成功的传代细胞株都可以用作同种来源的分泌细胞。另外某些被感染的抗体分泌细胞也可以传代，如EB病毒。这些技术都可以用做发明分泌免疫球蛋白传代细胞株。

在聚乙二醇等活化剂存在条件下，骨髓瘤细胞与抗体分泌细胞融合成为杂交瘤细胞。现在已经有公开发表的具体标准和方法，在此不做陈述。决定成败的关键更主要的是传代细胞株的选择与传代方法，以及选择抗体分泌细胞的种群。后续则依赖于应用正确的致敏源促使哺乳动物产生这些细胞。

首选的杂交瘤制备方法，分离免疫小鼠的脾细胞并与同种骨髓瘤细胞株进行融合，如：NS-1骨髓瘤细胞加入50％PEG，细胞融合后使其在特定的培养基中生长。其他一些成熟的骨髓瘤细胞株有：HAT或AT敏感细胞株，他们不能够在含有次黄嘌呤、氨喋呤和胸苷的HAT培养基生长，或者不能在含有重氮丝氨酸和次黄嘌呤的AH培养基生长。

因此，只有与正常细胞融合的传代细胞才能够在选定的培养基中生存；未融合的HAT或AH敏感细胞将凋亡，(不能传代的正常细胞即便融合最终还是会凋亡)。只有培养融合的传代细胞才能够经过筛选而得到理想的抗体。

培养在选定培养基中的融合细胞或其他方法的细胞传代需经过筛选。而筛选细胞的理想特征就是可以分泌抗体。有许多针对GnRH受体识别抗体的筛选方法可以采用，如基于免疫反应的试验检测培养基，包括免疫蛋白印迹试验，酶联免疫吸附试验和放射免疫试验等等。

确定了一个可以分泌正确抗体的细胞株，此抗体便可以通过标准的纯化技术分离出来。另外抗体的标记也有另外的标准技术。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体或其片段。